長托寧對內(nèi)毒素休克兔的保護作用及其機制的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本文通過建立兔內(nèi)毒素休克模型,觀察長托寧對內(nèi)毒素休克兔血流動力學、細胞因子、各器官組織形態(tài)學的影響,進一步探討長托寧在內(nèi)毒素休克兔中的保護作用及其可能的機制,以及臨床應(yīng)用中可選擇的合適的劑量范圍,為擴大長托寧的臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。 研究材料和方法: 1.實驗材料和方法。 將35只新西蘭大白兔隨機分成5組。分別為正常對照組(n=7)、休克組(n=7)、長托寧低劑量組(n=7)、長托寧中劑量組(n=7)、長托

2、寧高劑量組(n=7)。參照MartinAlbert方法制作內(nèi)毒素休克兔模型。耳緣靜脈注射20%烏拉坦(1000mg/kg)麻醉。將兔仰臥固定在手術(shù)臺,剪去頸部被毛,碘伏消毒,切開氣管,保持呼吸道通暢,無菌分離一側(cè)頸動脈和頸靜脈,用聚乙烯塑料管進行插管。頸動脈管經(jīng)三通閥與血壓換能器相連接,插管后立即注入0.3mL肝素生理鹽水(含肝素300iu),通過BL-410生物機能實驗系統(tǒng)連續(xù)描記血壓、心率。頸靜脈管用于給藥及輸液。按600μg/kg

3、靜脈注射大腸桿菌脂多糖(LPS),每毫克LPS溶于2mL生理鹽水,1分鐘注射完畢。休克組靜注LPS后立即靜注1mL/kg生理鹽水。長托寧低、中、高劑量組分別于靜注LPS后立即靜注長托寧0.05、0.15、0.45mg/kg,靜注前用生理鹽水稀釋至1mL/kg。正常對照組注射等量生理鹽水。 記錄給藥后每隔30分鐘的心率及血壓,分別于不同時間點留取靜脈血約3mL,離心后留取血清,用于測定腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO

4、)、內(nèi)皮素-1(ET-1)含量。給藥6小時后實驗結(jié)束,處死動物。打開腹腔,取兔的心、肺、肝、腎、回腸,以10%福爾馬林固定,常規(guī)制作石蠟切片,H.E染色,光學顯微鏡形態(tài)學觀察及回腸上皮損傷指數(shù)測定。取回腸(距回腸末端7cm取1cm腸段),5%戊二醛固定,電鏡觀察。 2.檢測指標。 2.1各組實驗動物不同時間點的血壓與心率變化。 2.2各組實驗動物TNF-α、NO、ET-1含量測定。 2.3光學顯微鏡下心、

5、肺、肝、腎、回腸粘膜形態(tài)學變化及回腸上皮損傷指數(shù)測定。 2.4電子顯微鏡下回腸粘膜的形態(tài)學改變。 3.檢測方法。 TNF-α的檢測采用雙抗體夾心酶標法測定(ELISA法),試劑盒由上海軒昊科技發(fā)展有限公司提供;NO的檢測采用化學反應(yīng)法,試劑盒由南京建成生物工程研究所提供;ET-1的檢測采用放射免疫法,試劑盒由北京科美東雅生物技術(shù)有限公司提供。檢測方法均按照試劑盒說明操作。 4.統(tǒng)計學處理。 采用S

6、PSS13.0軟件包處理。計量資料以均數(shù)±標準差((-x)±S)或以均數(shù)((-x))表達;正態(tài)分布變量多組間比較用方差分析;兩組間比較,正態(tài)分布變量用t檢驗,P<0.05被認為有統(tǒng)計學意義。 研究結(jié)果 1.兔血壓及心率的變化。 與休克組相比,長托寧中、高劑量組動物的心率有明顯改善,而低劑量組改善不明顯。給藥后90分鐘,中劑量組動物血壓較休克組明顯改善,低、高劑量組改善不明顯。實驗全過程中,中劑量組動物心率及血壓下

7、降程度較小,波動較小。 2.TNF-α、NO、ET-1含量的變化。 相對于正常對照組,休克組及長托寧低、中、高劑量組動物血清TNF-α、NO、ET-1含量均顯著升高。而與休克組相比,長托寧低、中、高劑量組動物血清TNF-α、NO、ET-1含量均有不同程度下降,中劑量組下降更明顯。 3.光學顯微鏡檢查。 休克組動物心、肺、肝、腎、回腸組織均有明顯細胞變性、壞死,間質(zhì)充血、水腫、出血,中性粒細胞浸潤。長托寧低

8、、中、高劑量組動物各組織病變不同程度較休克組減輕,中劑量組病變減輕更明顯。 3.1心臟:長托寧低、高劑量組心肌纖維水腫,間質(zhì)充血、水腫,間隙增大。中劑量組僅見心肌纖維及間質(zhì)輕度水腫。 3.2肺:長托寧低、高劑量組肺泡隔增厚,粒細胞浸潤,肺泡腔及小血管可見聚集的紅細胞,部分肺泡腔萎縮。中劑量組僅見肺泡隔輕度增厚并少量粒細胞及紅細胞浸潤。 3.3肝:長托寧低、高劑量組肝細胞水腫、壞死,肝竇內(nèi)充血,可見粒細胞浸潤。中劑

9、量組僅見少許粒細胞浸潤,肝竇內(nèi)可見少量紅細胞。 3.4腎:長托寧低、高劑量組腎小管上皮細胞水腫,部分腎小管上皮變性,腎小球毛細血管腔擴張、充血,粒細胞浸潤。中劑量組僅見腎小管上皮細胞輕度水腫,腎小球毛細血管腔及間質(zhì)少許充血及粒細胞浸潤。 3.5回腸:長托寧低、高劑量組回腸粘膜及粘膜下層間質(zhì)毛細血管充血、水腫,間質(zhì)內(nèi)大量粒細胞浸潤,絨毛廣泛水腫,絨毛的上皮細胞壞死、脫落、糜爛。中劑量組僅見回腸粘膜及粘膜下層粒細胞浸潤,絨毛

10、形態(tài)較完整,間質(zhì)充血不明顯。 4.回腸組織Chiu's法評分 休克組及長托寧低、中、高劑量組回腸組織評分均顯著高于正常組。與休克組相比,長托寧低、中、高劑量組評分不同程度降低,中劑量組降低更明顯。5.回腸組織電子顯微鏡檢查 休克組動物回腸微絨毛腫脹、縮短、稀疏,線粒體重度腫脹,嵴斷裂,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顯著擴張,細胞排列不整,核固縮,可見凋亡細胞。長托寧低、中、高劑量組動物回腸組織病變不同程度較休克組減輕,中劑量組病變程度最

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