STAT5、cyclinD1、PCNA在膠質(zhì)瘤組織的表達(dá)及意義.pdf

1、Y784002中圖分類號(hào)：R651；R7394102瀘糾痿學(xué)院研究生碩士學(xué)位論文STAT5、cyclinDl、PCNA在膠質(zhì)瘤組織的表達(dá)及意義二Oo五年五月床意義，通過了解膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長規(guī)律，研究膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制，為尋找新的治療膠質(zhì)瘤途徑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：本實(shí)驗(yàn)收集了瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科2000年至2003年經(jīng)手術(shù)切除和病理證實(shí)的51例膠質(zhì)瘤，男性32例，女性19例，年齡26—72歲。其中(1993年WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類法

2、Kernohan分級(jí))I級(jí)12例，II級(jí)15例，III級(jí)11例，IV級(jí)13例，另取10例腦外傷內(nèi)減壓切除腦組織為正常對(duì)照組。采用免疫組化sP法檢測51例不同級(jí)別膠質(zhì)瘤組織、10例正常腦組織中的STAT5、cyclinDl、PCNA的表達(dá)水平。所有標(biāo)本取材后經(jīng)10％甲醛固定、常規(guī)脫水、透明、石蠟包埋制成蠟塊，切片機(jī)切成5IIIll的連續(xù)石蠟切片。石蠟切片脫蠟至水，3％雙氧水阻斷30min，微波修復(fù)抗原5min。10％正常山羊血清37。C下

3、封閉非特異性抗原30min。傾去血清，滴加STAT5、cyclinDl、PCNA一抗50pl，置濕盒內(nèi)4“C過夜。PBS沖洗5minX3次，滴加生物素化二抗工作液，加蓋濕盒內(nèi)37“C下30min。PBS振洗5min3次。加入鏈霉素抗生物索蛋白一過氧化酶溶液50pl，37“C下30min，PBS振洗5min3次DAB顯色液顯色。蘇木索襯染30秒。自來水沖洗，酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。STATS陽性表達(dá)位于細(xì)胞核或細(xì)胞漿，呈深黃色

4、顆?；蛐∑瑺睢５湫偷腸yclinDl、PCNA陽性表達(dá)均位于細(xì)胞核，呈棕黃或棕褐色顆粒。將免疫組化染色的切片置于高倍鏡(400)下觀察，細(xì)胞核或細(xì)胞漿呈黃色顆粒者定為STAT5陽性。細(xì)胞核呈棕黃或棕褐色顆粒者定為cyclinDl或PCNA陽性，細(xì)胞核無棕黃或棕褐色顆粒者定為陰性。二人重復(fù)連續(xù)觀察10個(gè)高倍視野，計(jì)算腫瘤細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，取平均值，計(jì)算百分率，分為4級(jí)，未見明顯陽性細(xì)胞為一，陽性細(xì)胞數(shù)(25％為，25％50％為十，)50