大鼠自體全層皮膚移植成活過程中表皮干細胞變化規(guī)律研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探索大鼠自體全層皮膚移植成活過程中表皮干細胞隨其所處微環(huán)境的不斷改變而改變的變化規(guī)律,為表皮干細胞的基礎研究向臨床應用提供理論依據(jù),為臨床改善自體皮膚移植的質量提供理論基礎,為組織工程皮膚的深入研究打下基礎。
  方法:2~3月齡Wistar大鼠42只,隨機分成七組(每組6只),分別記為第1組、第2組、第3組、第4組、第5組、第6組、第7組,每組分別代表自體皮膚移植術后七個時限點,即術后第1天、第3天、第5天、第7天、第14

2、天、第21天、第30天。每只大鼠于背部制作1.5cm x1.5cm面積大小的自體全層皮膚移植模型,并于手術當時在切取皮片的邊緣和術后不同時間點在移植皮片中央切除組織固定、包埋、制作病理切片。采用免疫組化的方法檢測表皮干細胞的表面標記物β1整合素、基因物質 p63的表達,來觀察不同時間點表皮干細胞數(shù)量的變化及其在皮膚各層的分布變化。免疫組化切片在200倍光學顯微鏡下觀察。每張切片隨機觀察5個不同視野,每個視野隨機計算100個表皮細胞及其中

3、的陽性細胞數(shù),并計算陽性細胞率。每張切片5個不同視野陽性細胞率的均數(shù)代表該標本陽性細胞率。每組動物所有陽性細胞率的均數(shù)代表該時限點陽性細胞率,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差( x±s)表示。每一時限點術后和術前進行對比研究以及術后各時限點之間進行對比研究,數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。
  結果:1、肉眼觀察每只動物自體全層皮膚移植效果理想,未見有明顯的感染和壞死,各個時限點移植的皮片外觀有明顯的區(qū)別。2、免疫組化檢測病理切片分為β1

4、整合素、基因物質 p63兩個指標。兩個指標的陽性細胞率在觀察的七個時限點中開始逐漸減少,在術后第3天左右達到最低,然后逐漸增加,在術后第7天左右其陽性細胞率開始接近或者超過術前,在術后第21天左右達到最高峰,然后又逐漸降低。且同一時限點同一標本連續(xù)切片中β1整合素陽性細胞率要低于基因物質 p63陽性細胞率:(1)、β1整合素:術后第1組陽性細胞率(16.00±0.716)%比術前(18.70±0.690)%低(p=0.000<0.05)

5、;術后第2組陽性細胞率(8.03±1.28)%比術前(18.90±1.747)%低(p=0.000<0.05);術后第3組陽性細胞率(12.03±0.924)%比術前(18.10±1.244)%低(p=0.000<0.05);術后第4組陽性細胞率(17.00±0.848)%與術前(17.33±0.864)%相比沒有統(tǒng)計學意義(p=0.215>0.05);術后第5組陽性細胞率(19.83±0.852)%比術前(18.27±0.786)%高

6、(p=0.004<0.05);術后第6組陽性細胞率(29.966±2.615)%比術前(18.33±0.615)%明顯高(p=0.000<0.05);術后第7組陽性細胞率(19.43±0.924)%比術前(18.40±0.579)%高(p=0.023<0.05);(2)基因物質p63:術后第1組陽性細胞率(26.53±0.786)%比術前(29.76±1.493)%低(p=0.001<0.05);術后第2組陽性細胞率(12.53±3.0

7、19)%比術前(29.73±3.238)%低(p=0.000<0.05);術后第3組陽性細胞率(19.36±1.176)%比術前(28.56±1.515)%低(p=0.000<0.05);術后第4組陽性細胞率(28.16±2.152)%與術前(28.33±2.572)%相比沒有統(tǒng)計學意義(p=0.517>0.05);術后第5組陽性細胞率(30.50±1.814)%比術前(28.10±1.543)%要高(p=0.013<0.05);術后第

8、6組陽性細胞率(39.97±2.832)%比術前(28.80±0.669)%明顯高(p=0.001<0.05);術后第7組陽性細胞率(29.80±1.043)%比術前(28.27±0.700)%高(p=0.015<0.05)。3、陽性細胞在術前主要位于表皮的基底層和毛囊隆突部,且呈片狀排列。隨著移植術后時間的推移,陽性細胞在皮膚中的排列結構逐漸紊亂,逐漸分布到表皮的各層,但從第21天組開始發(fā)現(xiàn)陽性細胞逐漸集中于表皮的基底層和毛囊隆突部,

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