n-3多不飽和脂肪酸在哮喘小鼠白三烯代謝及氣道炎癥中的作用.pdf

1、目的：(1)觀察哮喘小鼠白三烯B<,4>(LTB<,4>)、5脂氧合酶(5-LO)及其mRNA表達(dá)情況.(2)研究飲食中補(bǔ)充不同劑量的n-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)對哮喘小鼠LTB<,4>、5-LO的影響及其可能機(jī)制.(3)觀察過氧化物酶體增殖活化受體-γ(PPAR-γ)在哮喘氣道中的表達(dá)及n-3PUFA對它的影響.(4)探討n-3PUFA對哮喘小鼠氣道炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)、IL-4的影響及其機(jī)制. 方法：建立小鼠卵清白蛋白(O

2、VA)致敏和激發(fā)的哮喘模型.50只SPF級雄性BALB/c小鼠(3-5周)隨機(jī)分為五組,每組10只:A組(正常對照組),B組(哮喘模型組),C組(低劑量魚油干預(yù)組),D組(中劑量魚油干預(yù)組),E組(高劑量魚油干預(yù)組).正常組用生理鹽水,模型組及各干預(yù)組用OVA/A1(OH)<,3>混合凝膠于第8、21天腹腔注射(i.p)致敏,第32天開始激發(fā),每日一次,每次30分鐘,連續(xù)7天.每日上午8時30分C、D、E分別灌胃給予魚油0.12 g/k

3、g、0.24 g/kg、0.48g/kg,其余兩組以生理鹽水代替.末次激發(fā)后24小時內(nèi)處死小鼠用固相夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測血清及對支氣管肺泡灌洗液(BALF)中LTB<,4>、IL-4水平,行BALF細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù),BALF沉渣涂片作細(xì)胞分類計(jì)數(shù),肺組織作病理檢測觀察肺組織結(jié)構(gòu),免疫組化、RT-PCR法檢測肺組織中5-LO及PPAR-γ的表達(dá)情況等. 結(jié)果：1.細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類計(jì)數(shù):B組BALF細(xì)胞總數(shù)[(100

4、.39±25.62)×10<'7>/L]、嗜酸細(xì)胞百分比[(9.42±3.58)﹪]均顯著高于A組[分別為(21.51±6.24)×10<'7>/L、(0.16±0.07)﹪](均P<0.01);C組[分別為(89.50±23.73)×10<'7>/L、(5.89±2.06)﹪]、D組[分別為(59.13±16.99)×10<'7>/L、(3.31±1.09)﹪]、E組[分別為(48.89±11.62)×10<'7>/L、(1.92±0

5、.36)﹪],均低于B組,但仍高于A組(P<0.05或P<0.01). 2.光鏡下肺組織病理改變:小鼠肺組織切片HE染色B組可見支氣管和血管周圍炎性細(xì)胞浸潤,以淋巴細(xì)胞、EOS和中性粒細(xì)胞為主,支氣管上皮多處斷裂,并有基底膜增厚和平滑肌肥大等表現(xiàn);C組、D組、E組上述改變程度不一,均LLB組輕,其中以E組最為輕微.A組支氣管和血管周圍未見炎性細(xì)胞浸潤,細(xì)支氣管未出現(xiàn)增殖情況. 3.電鏡觀察肺組織超微結(jié)構(gòu):電鏡下A組(正常

6、對照組)顯示正常的肺泡隔和肺泡II型上皮細(xì)胞,支氣管纖毛上皮排列整齊;B組肺泡隔明顯增厚,炎癥細(xì)胞增多,基底膜增厚,肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹,出現(xiàn)板層小體及線粒體空泡現(xiàn)象,支氣管上皮細(xì)胞纖毛排列稀疏;C組、D組、E組上述改變程度不一,均比B組輕. 4.BALF中LTB<,4>濃度:B組BALF中LTB<,4>的濃度[(143.001±63.355)pg/ml]顯著高于A組[(41.437±14.422)pg/ml](P<0.01);

7、C組[(67.663±36.885)pg/ml]、D組[(46.416±15.785)pg/ml]、E組[(53.258±14.988)pg/ml]與B組比較明顯降低(P<0.01或P<0.05),其中D組、E組與A組比較無顯著性差異(P>0.05). 5.血清、BALF中IL-4濃度: B組血清IL-4濃度[(14.82±4.79)pg/ml]及BALF中IL-4濃度[(144.08±47.35)pg/ml]均較對照組高[分別

8、為(5.60±1.80)Pg/ml、(30.52±9.38)pg/ml](P<0.01):C組分別為[(11.32±4.05)pg/ml、(113.69±46.01)pg/ml]、D組分別為[(10.39±3.45)pg/ml、(80.55±23.74)pg/ml]和E組分別為[(9.29±3.37)pg/ml、(79.53+20.71)pg/ml]較A組均有所升高(P<0.05或P<0.01),其中D組、E組低于哮喘組(P<0.05)

9、. 6.免疫組化檢N5-LO表達(dá)結(jié)果:B組小鼠肺組織5-LO表達(dá)(0.201±0.019)明顯高于對照組(0.084±0.009)(P(O.01):C組(0.183±0.022)、D組(0.176±0.017)和E組(0.103±0.016)均有所升高,但低于哮喘組(P<0.05或P<0.01). 7.RT-PCR檢測5-LO mRNA表達(dá)的結(jié)果: 哮喘組小鼠5-LO mRNA的表達(dá)(0.605±0.057)明顯高于對照

10、組(0.236±0.019) (P<0.01);C組(0.408±0.049)、D組(0.328±0.024)、E組(0.244±0.020)呈不同程度的升高,但低于哮喘組(P<0.05或P(0.01). 8.免疫組化檢測tIPPAR-γ表達(dá)結(jié)果:哮喘組小鼠肺組織PPAR-γ表達(dá)(1.898±0.197)明顯低于對照組(3.104±0.294)(P<0.01);C組(3.677±0.412)、D組(4.045±0.479)和E組

11、(4.826±0.433)均較A組、B組明顯升高(P<0.05或P(0.01),各干預(yù)組問沒有顯著性差異(P>0.05). 9.相關(guān)分析:小鼠肺組織中5-LO mRNA含量與BALF中LTB<,4>濃度、BALF中IL-4濃度、BALF細(xì)胞總數(shù)成正相關(guān);小鼠BALF中LTB<,4>濃度與BALF中IL-4濃度、BALF細(xì)胞總數(shù)成正相關(guān);小鼠肺組織中PPAR-γ的表達(dá)與BALF細(xì)胞總數(shù)、BALF中IL-4濃度、小鼠肺組織中5-LO

12、 mRNA含量、BALF中LTB<,4>濃度呈負(fù)相關(guān). 結(jié)論：1.哮喘小鼠肺組織5-LO及其mRNA表達(dá)增多,其與氣道炎癥因子、炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)呈正相關(guān). 2.哮喘小鼠PPAR-γ表達(dá)較對照組下降,各干預(yù)組肺組織WAR-γ表達(dá)明顯增加,并與肺組織5-LO的表達(dá)、炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)、IL-4濃度呈負(fù)相關(guān). 3.小鼠補(bǔ)充n-3PUFA能夠降低LTB<,4>濃度,下調(diào)IL-4水平,減少EOS浸潤減輕氣道炎癥. 4.小鼠補(bǔ)