太平洋磷蝦磷脂提取純化及酶法制備富含n-3多不飽和脂肪酸磷脂的研究.pdf

1、以DHA、EPA為代表的n-3多不飽和脂肪酸(n-3 PUFA)具有重要的生理功能,如增進視覺系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、預防心腦血管疾病、抗炎作用等。n-3 PUFA有兩種天然存在的形式,甘油酯型和磷脂型。n-3 PUFA甘油酯型產(chǎn)品因n-3 PUFA結合在甘油酯分子上具有一定的生理功能,一直受到人們的關注。然而已有研究表明,n-3 PUFA磷脂型產(chǎn)品在消化吸收、穩(wěn)定性及生物利用度等活性方面優(yōu)于n-3 PUFA甘油酯型產(chǎn)品。天然形式的n-3

2、PUFA磷脂中,n-3 PUFA通常含量較低,且其來源有限,因此對如何提高磷脂型產(chǎn)品中n-3 PUFA含量的研究十分必要,并且具有良好的開發(fā)應用前景。目前,酶法制備n-3 PUFA磷脂的研究對象主要集中在大豆磷脂和蛋黃磷脂上,罕見對海洋動物磷脂的研究。
　　本論文以太平洋磷蝦為原料,首先研究了太平洋磷蝦磷脂的提取純化工藝,其次以得到的太平洋磷蝦磷脂為底物,研究了酶法制備富含n-3 PUFA磷脂的工藝,最后對產(chǎn)物磷脂的氧化穩(wěn)定性進行

3、研究。具體研究內(nèi)容及結果如下:
　　首先,采用有機溶劑乙醇提取太平洋磷蝦磷脂,同時通過單因素和正交實驗對提取工藝進行優(yōu)化,再用丙酮沉降純化磷脂,并對磷脂的主要組分進行分析。結果表明,最佳的提取工藝條件為:乙醇濃度95％,液固比6mL/g,提取時間4h,提取溫度40℃,在此最佳工藝條件下磷脂的得率為17.58%,純度為46.09%。經(jīng)過4℃丙酮沉降純化后,磷脂的純度提高到78.85%。通過高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器(HPLC-E

4、LSD)分析磷脂的主要組分,結果表明,太平洋磷蝦磷脂中的主要組分包括磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE),含量分別為75.92%、11.28%。
　　其次,對太平洋磷蝦磷脂與游離n-3 PUFA之間的酯交換(酸解)反應進行了研究,分別比較了不同酶、不同反應體系對反應的影響,同時通過單因素和響應曲面實驗對影響酸解反應的主要因素進行了優(yōu)化,并將反應前后磷脂的脂肪酸組成分析結果進行對比。最終確定以固定化磷脂酶 A1為催化劑,無溶劑反

5、應體系進行反應。得到反應的最佳工藝條件為:加酶量(以磷脂質(zhì)量計)30%、反應時間24h、反應溫度53℃、底物質(zhì)量比(游離脂肪酸/磷脂)7.6。在此條件下反應后,經(jīng)分析,產(chǎn)物磷脂中DHA含量達31.05%,EPA含量達13.88%。反應前后太平洋磷蝦磷脂DHA和EPA總含量由19.79%增加到44.93%。表明本方法有利于提高太平洋磷蝦磷脂中n-3 PUFA含量,可用于制備富含n-3 PUFA的磷脂。
　　最后,對原料磷脂和產(chǎn)物磷脂