n-3高不飽和脂肪酸對(duì)黑鯛幼魚生長(zhǎng)及脂肪代謝的影響.pdf

1、本文研究了飼料中添加n-3高不飽和脂肪酸對(duì)黑鯛幼魚生長(zhǎng)、體組成及血漿生化指標(biāo)的影響，并由此得出黑鯛幼魚達(dá)到最佳增重時(shí)對(duì)飼料中n-3 HUFA％及DHA/EPA的需要量，進(jìn)而通過(guò)研究組織中主要生酯酶(FAS)及主要脂解酶(HSL)的活性及基因表達(dá)來(lái)初步探討飼料n-3 HUFA調(diào)控黑鯛脂肪代謝的主要機(jī)理。研究?jī)?nèi)容包括：(1)飼料中添加不同水平n-3 HUFA對(duì)黑鯛幼魚生長(zhǎng)及體組成的影響；(2)飼料中DHA/EPA比值對(duì)黑鯛幼魚生長(zhǎng)及體組成的

2、影響；(3)黑鯛FAS及HSL基因克隆及序列分析；(4)飼料n-3 HUFA含量及DHA/EPA比值對(duì)黑鯛幼魚脂肪代謝相關(guān)酶活性及基因表達(dá)的影響。
　　 (1)選取平均體重為（8.08±0.09）g、健康、體質(zhì)均勻的黑鯛幼魚360尾，隨機(jī)放養(yǎng)入18個(gè)水泥池中搭建的網(wǎng)箱中。通過(guò)用魚油和玉米油調(diào)和脂肪酸含量，將試驗(yàn)飼料配制成n-3 HUFA含量分別為0.79，0.83，0.85，0.88，0.92，0.94％，DHA/EPA比值固定

3、(2.8/1)的試驗(yàn)飼料，隨機(jī)分配給六組，每組三個(gè)重復(fù)。每天投餌時(shí)間為8:00和16:00，以眼觀飽食(投餌率3～5％)為準(zhǔn)，試驗(yàn)條件同上。八周飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)黑鯛幼魚生長(zhǎng)性能、飼料效率，蛋白質(zhì)效率等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，并分析體組織常規(guī)成分組成及肝臟、肌肉和腹腔脂肪組織脂肪酸組成及血漿生化指標(biāo)的變化。試驗(yàn)結(jié)果表明，黑鯛脂肪細(xì)胞直徑呈減小趨勢(shì)，n-3 HUFA水平最高組顯著小于試驗(yàn)組3。肌肉脂肪含量受n-3 HUFA的顯著影響，且在第四組時(shí)達(dá)

4、到最低；黑鯛幼魚全魚組織常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分含量在各組之間差異不顯著。肝臟、肌肉及腹腔脂肪組織中∑SFA和16:0均隨飼料n-3 HUFA水平的增加里下降趨勢(shì)，∑n-3 HUFA呈顯著上升趨勢(shì)。各組織中DHA/EPA比值不受飼料脂肪酸的影響。黑鯛幼魚血漿甘油三酯和膽固醇含量隨飼料中n-3 HUFA的添加有下降趨勢(shì)。以增重率為參考指標(biāo)，在本試驗(yàn)條件下.黑鯛幼魚[（8.08±0.O9）g]獲得最佳增重時(shí)對(duì)飼料中n-3 HUFA的需要量為0.87％

5、DM，即8.7 g/kg飼料干物質(zhì)。
　　 (2)選取平均體重為(11.01±0.02)g的黑鯛幼魚420尾，在與試驗(yàn)一相同的條件下研究n-3 HUFA含量一定，DHA/EPA.比值不同(1.98，2.20，2.46，2.88，3.15，3.57，4.04)的試驗(yàn)飼料對(duì)黑鯛幼魚生長(zhǎng)性能、飼料效率、蛋白質(zhì)效率，體組織營(yíng)養(yǎng)組成及血漿生化指標(biāo)的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，與DHA/EPA最低組相比，黑鯛幼魚腹脂率(IPF raTiO2有明顯減

6、少，并在試驗(yàn)組3時(shí)達(dá)到最低。脂肪細(xì)胞直徑隨飼料DHA/EPA比值的變化趨勢(shì)不明顯，但在試驗(yàn)組5，6時(shí)顯著低于其它各組。試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)試驗(yàn)魚體組織營(yíng)養(yǎng)成分進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，肌肉脂肪含量在飼料DHA/EPA>2.46時(shí)有顯著降低，降幅約為8.59％。全魚組織脂肪沉積量在飼料DHA/EPA>3.15時(shí)顯著減少，最大降幅可達(dá)28.3％。各處理組背肌和腹腔脂肪組織n-3 HUFA含量不受飼料的影響，但DHA/EPA比值隨飼料水平的增加而增加。以增

7、重率(WGR)為參考指標(biāo)，二次曲線分析(y=-9.9707x2+62.696x+10.309，R2=0.9258；x，飼料DHA/EPA比值，y，WGR)表明，本試驗(yàn)條件下，黑鯛幼魚(11.01±0.02g)獲得最佳增重時(shí)飼料中DHA/EPA比值為3.15。
　　 (3)本研究克隆了黑鯛FAS和HSL基因片段，其片段長(zhǎng)度分別為464bp和664bp，分別編碼150和221個(gè)氨基酸。BLAST比對(duì)分析結(jié)果表明，黑鯛FAS基因片段同

8、斑馬魚（Danio rerio）同源性為76％。黑鯛HSL基因片段同斑馬魚同源性為69％。本試驗(yàn)對(duì)黑鯛FAS及HSL基因片段的克隆主要為以下試驗(yàn)中黑鯛幼魚FAS及HSL基因表達(dá)的熒光定量分析作準(zhǔn)備。
　　 （4)本試驗(yàn)主要通過(guò)分析組織中脂肪代謝主要酶的活性及基因表達(dá)水平，探討飼料中不同n-3 HUFA及DHA/EPA比值對(duì)黑鯛幼魚脂代謝影響的機(jī)理。對(duì)酶活的測(cè)定結(jié)果顯示，肝臟組織FAS活性較高，而腹腔脂肪(IPF)組織幾乎不能檢測(cè)

9、到該酶，說(shuō)明FAS在黑鯛幼魚中的表達(dá)具有組織特異性，以肝臟為脂肪合成主要器官。FAS活性在試驗(yàn)組1-4之間無(wú)顯著差異，當(dāng)飼料n-3 HUFA含量在0.92％以上時(shí)開始有顯著下降。腹腔脂肪組織中HSL活性隨飼料n-3 HUFA的添加有增加趨勢(shì)，當(dāng)飼料n-3 HUFA含量達(dá)到最高時(shí)(0.94％)，HSL活性增加到將近一倍。飼喂不同DHA/EPA比值飼料的試驗(yàn)魚肝臟組織中FAS活性不受飼料1-4的影響，隨著飼料DHA/EPA比值的進(jìn)一步增加呈

10、顯著下降趨勢(shì)。脂肪組織HSL活性隨飼料DHA/EPA比值的增加有上升趨勢(shì)，但當(dāng)飼料DHA/EPA大于2.88時(shí)進(jìn)入平臺(tái)期，保持在0.79左右。熒光定量分析與酶活測(cè)定結(jié)果相似，同樣表現(xiàn)為FAS表達(dá)水平在試驗(yàn)組4以后開始下降，而HSL隨飼料n-3 HUFA或DHA/EPA升高而上升。以上研究結(jié)果表明，飼料n-3 HUFA及DHA/EPA對(duì)黑鯛幼魚脂肪代謝影響主要是對(duì)脂肪酸合成酶(FAS)和激素敏感脂肪酶(HSL)活性及基因表達(dá)進(jìn)行同步調(diào)控的