前體淋巴母細胞淋巴瘤-急性淋巴母細胞白血病發(fā)生細胞的研究.pdf

1、目的：通過急性T淋巴細胞白血病細胞系Jurkat，探討分離鑒定白血病干細胞的方法；初步探討分離及鑒定原代前體淋巴母細胞淋巴瘤/急性淋巴細胞白血病干細胞的方法。方法：流式細胞分析方法，檢測Jurkat細胞的分子表型；應(yīng)用CD34免疫磁珠分選CD34+細胞；單克隆培養(yǎng)方法獲得CD34-細胞；RT-PCR法分別對CD34+和CD34-單克隆細胞檢測CD34基因和腫瘤干細胞相關(guān)基因的表達；體外軟瓊脂克隆和SCID小鼠體內(nèi)成瘤實驗，檢測CD34+

2、和CD34-細胞的克隆形成和致瘤能力；流式細胞分選方法，對原代急性淋巴細胞白血病中不同分子表型細胞進行分選及RT-PCR法檢測急性淋巴細胞白血病中常見的染色體異位。 結(jié)果：Jurkat的細胞表型均符合分化的T淋巴細胞特點；在Jurkat細胞群中可以分出CD34+CD38+CD7+和CD34-CD38+CD7+兩群分化程度不同的細胞；體外培養(yǎng)和SCID小鼠體內(nèi)致瘤實驗顯示CD34+細胞可通過CD34表達逐漸減弱的方式向CD34-細

3、胞分化，而這一分化過程是不可逆的；CD34+和CD34-克隆細胞在造血干細胞相關(guān)基因Wnt1，Bmi1，Lef1，ABCG2和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因的表達上沒有差異；CD34+和CD34-細胞均可在體外無限增殖，形成單克隆細胞株，軟瓊脂克隆形成能力無顯著差別；CD34+和CD34-細胞在SCID小鼠體內(nèi)的致瘤能力無差異。 結(jié)論：磁珠細胞分選方法可以有效分選陽性表達細胞；Jurkat細胞系中的所有細胞均具有T細胞免疫表型，提示Jurk

4、at細胞系的腫瘤發(fā)生細胞應(yīng)為已定向分化的表型為CD34+CD38+CD7+的T淋巴細胞祖細胞，而非造血干細胞；在Jurkat細胞系中一部分CD34+細胞向CD34-細胞分化，而另一部分則維持CD34的表達，這提示Jurkat中的CD34+細胞具有干細胞特點，即存在自我復(fù)制、有限分化和無限增殖的能力，但并不意味著其下游分化的CD34-細胞不具有無限增殖能力和致瘤能力。CD34+向CD34-細胞的轉(zhuǎn)化是一個CD34的表達逐漸減弱的過程。Ju