附子質(zhì)量評(píng)價(jià)及烏頭堿類成分藥動(dòng)學(xué)研究.pdf

1、本論文分附子質(zhì)量評(píng)價(jià)研究和附子中烏頭堿類成分藥動(dòng)學(xué)研究?jī)刹糠帧?一、第一部分應(yīng)用HPLC以及R285HPLC/MS技術(shù)對(duì)附子生藥指紋圖譜的建立與附子炮制品的含量測(cè)定進(jìn)行了研究。附子(Radix Aconiti Lateralis Praeparata)為毛茛科烏頭屬植物烏頭 Aconitum carmichaeli Debx．的子根的加工品，從附子中分離鑒定的化學(xué)成分主要有生物堿和脂類兩大類化合物。國(guó)內(nèi)外研究表明，附子生物堿類化

2、合物具有多方面的藥理活性和臨床功效。歷版《中華人民共和國(guó)藥典》對(duì)于附子的質(zhì)量控制都是對(duì)其酯型生物堿的限量檢查。為了更科學(xué)、客觀地反映附子的內(nèi)在質(zhì)量，建立基于中藥成分系統(tǒng)研究基礎(chǔ)上的指紋圖譜是一種有效的手段。將LC/MS技術(shù)應(yīng)用于中藥指紋圖譜的研究中，是對(duì)常規(guī)色譜強(qiáng)有力的支持，通過對(duì)多種流出成分的質(zhì)譜檢測(cè)，可增加指紋圖譜的“可知性”。HPLC技術(shù)對(duì)于中藥指紋圖譜研究中藥材提取方法的研究，實(shí)驗(yàn)條件的選擇與優(yōu)化以及MS技術(shù)對(duì)于中藥成分的歸屬等

3、均起著重要的作用。本論文對(duì)附子生藥指紋圖譜建立中的分析方法進(jìn)行了研究，采用Hepersil BDS C<,18>色譜柱進(jìn)行附子生物堿成分液相分離的色譜條件；運(yùn)用HPLC/MS技術(shù)對(duì)附子生藥中的主要色譜峰進(jìn)行了初步歸屬；利用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件評(píng)價(jià)了各批樣品指紋圖譜間的相似程度。研究結(jié)果表明，以IIPLC法建立的附子生藥指紋圖譜較全面地反映了附子的內(nèi)在質(zhì)量，可作為附子生藥質(zhì)量控制及其炮制品指紋圖譜建立的依據(jù)之一。 在指紋

4、圖譜研究的基礎(chǔ)上，本論文還對(duì)附子生藥及其炮制品中的主要生物堿成分-雙酯型生物堿烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿以及單酯型生物堿苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰中烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的含量進(jìn)行了測(cè)定，為附子生藥及其炮制品質(zhì)量控制的建立提供科學(xué)支撐。 二、第二部分建立了體外血漿溫孵法測(cè)定烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿水解規(guī)律的方法?？瞻淄醚獫{加入不同濃度的3種生物堿混合對(duì)照品溶液，通過對(duì)溫孵不同時(shí)間血漿樣品的預(yù)處理(沉淀蛋白、除雜)、分離和檢測(cè)等

5、過程實(shí)現(xiàn)復(fù)雜生物樣品中待測(cè)成分的分離分析。所建立的體外水解方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、可控，對(duì)上述3種成分的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究具有一定的參考意義。 在體外血漿溫孵試驗(yàn)和急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，建立了附子總生物堿中主要成分(烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿)在大鼠血漿樣品中UPLC/MS/MS測(cè)定法。大鼠血漿中加入一定體積磷酸，以固相萃取法提取待測(cè)成分，采用UPLC/ESI/MS/MS聯(lián)用技術(shù)，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描方式(烏頭堿監(jiān)測(cè)離子對(duì)646.3→5

6、86.0和646.3→367.9；中烏頭堿監(jiān)測(cè)離子對(duì)632.3→572.0和632.3→354.0；次烏頭堿監(jiān)測(cè)離子對(duì)616.3→556.0和616.3→337.9)同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中附子總堿各主要成分的濃度；優(yōu)化的色譜條件為Acquity UPLC<'TM> BEH C<,18>色譜柱，乙腈-0.05％氨水溶液為流動(dòng)相，梯度洗脫，3種生物堿類成分在3 min內(nèi)即可完全分離，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾樣品的測(cè)定；血漿樣品提取回收率均高于85％；定

7、量限烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿分別為0.0516 ng·mL<'-1>，0.0744 ng·mL<'-1>和0.0427 ng·mL<'-1>；日內(nèi)和日間精密度的RSD均小于6％。該測(cè)定方法具有靈敏度高、專屬性強(qiáng)、快速的優(yōu)點(diǎn)，符合生物樣品分析要求。選取3只大鼠灌胃(ig)附子總堿，灌胃給藥劑量為0.2 g附子生藥·kg<'-1>。從附子總堿大鼠灌胃的血藥濃度．時(shí)間曲線可以看出，烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿的藥時(shí)曲線均為雙峰，無法用房室模型

8、擬合，推測(cè)雙峰是由于3種成分的腸肝循環(huán)造成的。烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿按非線性統(tǒng)計(jì)矩法計(jì)算的AUCO-t分別為4.277±0.754，7.950±2.909和24.75±4.05 ng·mL<'-1>·h；t<,1/2>分另0為1.40±0.26，1.49±0.08和1.73±0.03 h；MRT分別為3.758±0.524，3.645±0.477和4.012±0.381 h。通過上述研究，初步得出了烏頭堿、中烏頭堿和次烏頭堿藥動(dòng)學(xué)的