鼻咽癌患者不同部位EBV毒株基因多態(tài)性檢測(cè)與分析.pdf

1、鼻咽癌患者不同部位EBV毒株基因多態(tài)性的檢測(cè)與分析摘要目的：應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)同一鼻咽癌患者配對(duì)的癌組織、咽漱液和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)標(biāo)本基因分型及序列分析是否一致，旨在說(shuō)明同一鼻咽癌患者不同部位的EBV是否由同一種EBV毒株感染，以尋找是否存在高致癌性的EBV毒株。方法：選取20例臨床確診的鼻咽癌患者作為研究對(duì)象，取其石蠟包埋組織進(jìn)行病理切片，采用原位雜交技術(shù)檢測(cè)鼻咽癌組織中EBERl的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，篩選鑒定出EBV陽(yáng)性NPC患者

2、。收集EBV陽(yáng)性患者配對(duì)的石蠟包埋組織、咽漱液和PBMC提取DNA，應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)EBV1／2分型，PCR結(jié)合限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)分析檢測(cè)F／f分型以及C／D分型，同時(shí)對(duì)EBER和EBNAl基因擴(kuò)增進(jìn)行序列分析。結(jié)果：①20例鼻咽癌組織標(biāo)本中有18例EBERl陽(yáng)性，陽(yáng)性率為90％。②18例陽(yáng)性標(biāo)本中有17例分型成功，1例患者癌組織和咽漱液配對(duì)標(biāo)本1／2分型和F／f分型不同，其余配對(duì)標(biāo)本的EBV基因分型均一致，同時(shí)以1型、

3、F型及C型為主。③在18例配對(duì)標(biāo)本的EBER和EBNAl基因序列分析中，有7例標(biāo)本EBER和EBNAl基因擴(kuò)增成功，其中2例患者癌組織和咽漱液配對(duì)標(biāo)本在EBER基因，1例在EBNAl基因分析中表現(xiàn)為不同的序列變異，其余患者配對(duì)的癌組織和咽漱液中表現(xiàn)為相同序列，即同一患者癌組織和咽漱液是由同一種EBV毒株感染所致。④由于血液標(biāo)本較難擴(kuò)增，同一患者咽漱液、癌組織和PBMC配對(duì)標(biāo)本僅有3例PCR擴(kuò)增成功，其中1例在EBER基因2例在EBNAl

4、基因分析中三種不同部位來(lái)源的EBV基因序列一致。結(jié)論：同一患者不同部位的基因分型和基因序列一致，表明同一患者不同部位的EBV由同一種EBV毒株感染。臨床咽漱液標(biāo)本的采集更為方便，提示鼻咽癌患者咽漱液中的EBV分型對(duì)于分析組織中的EBV毒株具有一定的指導(dǎo)意義。但是由于在個(gè)別患者中仍存在不一致的情況，因此在實(shí)驗(yàn)分析過(guò)程中應(yīng)謹(jǐn)慎操作。碩士研究生：聶亞紅(臨床檢驗(yàn)診斷學(xué))指導(dǎo)老師：劉成玉教授羅兵教授關(guān)鍵詞：皰疹病毒4型，人；鼻咽癌；EBER；E

5、B病毒核抗原1；多態(tài)性t■，^11，loI，，，0，目錄弓l言1第一章材料和方法11儀器、試劑和耗材312標(biāo)本采集413EBV陽(yáng)性鼻咽癌標(biāo)本的篩選414核酸提取“6151／2分型、F／f分型及C／D分型檢測(cè)816EBV潛伏期基因EBER和EBNAl序列多態(tài)性檢測(cè)917統(tǒng)計(jì)學(xué)分析1O第二章結(jié)果1221EBV陽(yáng)性標(biāo)本的鑒定12221／2(A／B)分型、C／D及F／f分型結(jié)果”1323EBER和EBNAl編碼基因序列分析16第三章討論21d、