青島和廣州鼻咽癌組織中EBV核抗原2基因多態(tài)性的比較和分析.pdf

1、目的：EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)屬皰疹病毒科γ亞科成員，與多種人類腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，如Burkit’s淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma, BL)、何杰金病(Hodgkin’s disease, HD)、鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)、乳腺癌以及胃癌(gastric carcinoma, GC)等。有研究表明有超過(guò)90%成人感染過(guò)EBV，但EBV相關(guān)腫瘤的

2、分布則具有明顯的地域性和人群傾向性，除環(huán)境因素和遺傳因素外，是否存在與EBV相關(guān)腫瘤有關(guān)的EBV基因變異一直是倍受關(guān)注的熱點(diǎn)問題。本研究選擇青島和廣州地區(qū)EBV陽(yáng)性鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)組織作為研究對(duì)象，對(duì)EBV核抗原(EBV nuclear antigen, EBNA)2編碼基因的多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)和分析，旨在探討EBV基因多態(tài)性及其在EBV陽(yáng)性NPC發(fā)生中的意義。
　　方法：①聚合酶鏈

3、反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)結(jié)合DNA測(cè)序檢測(cè)EBV陽(yáng)性NPC標(biāo)本中EBNA2基因的多態(tài)性，應(yīng)用DNAStar5.0軟件中MegAlign對(duì)序列進(jìn)行對(duì)比分析，并與EBV標(biāo)準(zhǔn)株B95-8序列進(jìn)行比較。②根據(jù)測(cè)序結(jié)果，將其序列標(biāo)準(zhǔn)化處理后，應(yīng)用DNAStar5.0軟件生成系統(tǒng)樹。③根據(jù)各基因出現(xiàn)的共有突變結(jié)合系統(tǒng)發(fā)生樹對(duì)各基因變異進(jìn)行分類，初步分析基因變異對(duì)相關(guān)基因功能的影響。④測(cè)序結(jié)果與我們前期對(duì)青

4、島地區(qū)EBV陽(yáng)性鼻咽癌的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：本研究廣州地區(qū)32例EBV陽(yáng)性NPC及39例TW標(biāo)本EBNA2基因擴(kuò)增及測(cè)序成功，根據(jù)系統(tǒng)發(fā)生樹中EBNA2的變異模式以及以往EBNA2基因多態(tài)性的研究結(jié)果，鑒定歸納出E2-A，E2-C和B95-8樣3種亞型。
　?、貳2-A為最常見的亞型(38/71,52.1%)，NPC1為其代表株，該亞型有5個(gè)共有突變，包括2個(gè)錯(cuò)義突變 aa476(Glu→Gly/Trp)和 aa4

5、86(Ile→Thr)，3個(gè)同義突變 aa370(cct→cca)，aa417(acg→aca)和aa470(tca→tct)。有6個(gè)其它散在的突變，分別為aa331(Pro→Leu)，aa383(cct→cca)，aa390(ggt→gga)，aa411(Val→Ile)，aa438(Ile→Leu)和aa484(Pro→His)。
　?、贓2-C為次要亞型(NPC3為代表株)，該亞型存在1處共有突變(aa370, cct→cc

6、a)和2個(gè)aa缺失(aa357和358)，有3處散在的突變分別為aa378(Ger→Tyr)，aa411(Val→Ile)和aa451(Pro→His)。值得注意的是，我們發(fā)現(xiàn)E2-C亞型與 GD1株序列高度一致，而GD1一直作為我國(guó)南方地區(qū) NPC的代表毒株。
　?、?B95-8樣亞型為最少見一類亞型(代表株為TA56)，僅有aa370一個(gè)位點(diǎn)的變異(cct→cca)。
　?、芙y(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，NPC和健康人群TWs中3

7、種EBNA2亞型的分布有明顯差異(P＜0.01)，NPC中E2-A亞型所占比例(71.9%,22/32)明顯高于TW(38.5%,15/39)，TW中B95-8樣亞型所占比例(25.6%,10/39)明顯高于NPC(0%,0/32)。
　　結(jié)論：①E2-A亞型是中國(guó)南北方地區(qū)的優(yōu)勢(shì)流行株。
　?、贓BNA2各亞型在NPC和TW中分布差異明顯，提示E2-A亞型與NPC的發(fā)生密切相關(guān)，而B95-8樣亞型在健康人群中更為常見。