髓鞘堿性蛋白神經(jīng)毒性的機(jī)制研究.pdf

1、背景:中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后會(huì)導(dǎo)致髓鞘降解，這不僅抑制神經(jīng)元生長(zhǎng)，甚至誘導(dǎo)神經(jīng)元變性死亡。脫髓鞘后，髓鞘相關(guān)蛋白（Nogo，MAG，OMgp和MBP）將暴露于組織外，產(chǎn)生病理影響。目前對(duì)Nogo，MAG，OMgp等“myelin inhibitor”通過Nogo或PirB受體抑制神經(jīng)再生的研究較為深入具體。生理情況下，MBP與質(zhì)膜內(nèi)表面緊密結(jié)合，維持正常的髓鞘形態(tài)和結(jié)構(gòu)。髓鞘解體后，MBP由胞內(nèi)脂相環(huán)境暴露于胞外水相環(huán)境，部分MBP從髓鞘解

2、脫以游離形式存在于細(xì)胞外基質(zhì)中而起作用。長(zhǎng)期以來，脫髓鞘病變后，MBP對(duì)神經(jīng)元是否有直接作用仍未清楚。
　　目的:我們發(fā)現(xiàn)MBP在體外具有選擇性神經(jīng)毒性作用。本課題擬進(jìn)一步確認(rèn)MBP的神經(jīng)毒性作用，篩選鑒定與其相互作用的膜組分并闡明其作用機(jī)制。此研究將有助于我們更好的理解脫髓鞘導(dǎo)致神經(jīng)元損傷的機(jī)制，為今后的臨床治療提供有力指導(dǎo)。
　　方法:我們利用DAPI-PI雙染鑒定神經(jīng)元死亡情況;利用免疫細(xì)胞化學(xué)方法判斷MBP的結(jié)合方式

3、;利用蛋白免疫印跡，電生理，鈣成像，鈣黃綠素通透，人工脂質(zhì)體分析等實(shí)驗(yàn)去探索MBP引起神經(jīng)元死亡的機(jī)制。
　　結(jié)果:MBP可以特異地結(jié)合到體外培養(yǎng)的神經(jīng)元表面并特異地誘導(dǎo)神經(jīng)元死亡。MBP結(jié)合到神經(jīng)元表面具有堿性依賴性，因?yàn)檫@種結(jié)合可以被酸性磷脂阻斷并受到其他堿性蛋白的競(jìng)爭(zhēng)性阻斷。進(jìn)一步的研究表明，MBP通過去極化神經(jīng)元膜、增加對(duì)離子和大分子的通透、降低神經(jīng)元膜的流動(dòng)性來損傷神經(jīng)元膜的功能并破壞其完整性。最后，人工脂質(zhì)體實(shí)驗(yàn)顯示M