β-欖香烯抗血管生成作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的：β一欖香烯是從莪術(shù)中提取的有效抗腫瘤成分，在腫瘤治療中獲得了良好的效果。本研究通過觀察β一欖香烯對血管內(nèi)度細(xì)胞的增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡作用，檢測其對血管內(nèi)皮細(xì)胞堿性成纖維細(xì)胞生長因子受體mRNA表達(dá)的影響，探討β一欖香烯抗血管生成作用的機(jī)制，并利用兔角膜移植瘤血管生成模型，檢測β一欖香烯體內(nèi)抗血管生成效應(yīng)。 方法：MTT法檢測β-欖香烯對EcV一3O4細(xì)胞的Ic<,50>值，利用PI染色進(jìn)行流式細(xì)胞儀凋亡檢測及細(xì)胞周期分

2、析，電鏡及DNA凝膠電泳觀察不同濃度β-欖香烯作用后的改變。利用Annexinv～FITc／PI聯(lián)合標(biāo)記，行熒光相差顯微鏡觀察及流式細(xì)胞儀早期凋亡分析。MTT法觀察bFGF及β-欖香烯對EcV一3O4細(xì)胞增殖的影響；半定量RT—PcR檢測β-欖香烯作用下EcV一3O4細(xì)胞bFGF受體mRNA表達(dá)的變化。裸鼠皮下種植人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系sHG44細(xì)胞，形成實(shí)體膠質(zhì)瘤。將所得膠質(zhì)瘤實(shí)體小塊移植于兔角膜，建立角膜移植瘤血管生成模型。經(jīng)兔耳緣靜脈注

3、射β一欖香烯，干預(yù)兩周后應(yīng)用Ⅷ因子相關(guān)抗原免疫組化染色及圖像分析技術(shù)，檢測移植膠質(zhì)瘤組織內(nèi)微血管密度變化。 結(jié)果：MTT法檢測顯示β一欖香烯對EcV一304細(xì)胞有顯著的增殖抑制作用，Ic<,50為(s8.3±8.1)μg／ml。流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)，β一欖香烯在60ug／ml即可明顯地將細(xì)胞阻滯于Gα／G<,1>期(P<0．05)，并可見到“亞G<,1>峰”。電鏡觀察到典型的凋亡細(xì)胞超微形態(tài)改變，DNA凝膠電泳則可見特征性的“梯形帶

4、”。30μg／ml β-欖香烯作用24h即可誘導(dǎo)ECV-304細(xì)胞早期凋亡，而大劑量(100 ug／ml)則引起現(xiàn)明顯細(xì)胞毒作用。20ug／ml β一欖香烯可以抑制單純由bFGF引起的ECV-304細(xì)胞增殖，并可以降低ECV-304細(xì)胞bFGF受體的mRNA表達(dá)。兔角膜移植瘤血管生成模型成功建立；β-欖香處理組移植膠質(zhì)瘤微血管密度明顯低于對照組。 結(jié)論：小劑量的β一欖香烯即可以誘導(dǎo)EVC-304血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生早期凋亡。較小劑