DNA修復(fù)基因XPD單核苷酸多態(tài)性與卵巢癌的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的： 卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤，90％以上來自上皮組織。由于卵巢癌迄今仍無完善的早期診斷方法和有效的晚期治療手段，成為威脅廣大婦女生命和健康的主要疾病。卵巢癌的病因目前不十分明確，遺傳和環(huán)境因素的共同作用導(dǎo)致卵巢癌的發(fā)生。環(huán)境致癌物及/或機(jī)體代謝產(chǎn)物攻擊細(xì)胞時(shí)，可引起DNA損傷。生物體能夠保持遺傳信息的完整和穩(wěn)定，主要依賴于體內(nèi)一系列DNA修復(fù)系統(tǒng)。DNA損傷的修復(fù)途徑很多，核苷酸切除修復(fù)(NER)是人類最重要的修復(fù)途徑。核

2、苷酸切除修復(fù)(NER)基因具有高度多態(tài)性。DNA修復(fù)基因的多態(tài)性可使機(jī)體修復(fù)損傷DNA的能力有所不同，導(dǎo)致基因的穩(wěn)定性和細(xì)胞的癌變率有所改變。研究表明，DNA修復(fù)能力低下與腫瘤易感性增高相關(guān)。因此，DNA修復(fù)基因多態(tài)性可能是卵巢癌的遺傳易感性因素之一。 本研究旨在探討核苷酸切除修復(fù)基因XPD第10外顯子312密碼子Asp/Asn(即G/A)和第23外顯子751密碼子Lys/Gln(即A/C)單核苷酸多態(tài)性(single nucl

3、eotidepolvmorphism，SNP)與我國北方漢族婦女卵巢癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，從分子生物學(xué)水平為卵巢癌的預(yù)防及診治提供依據(jù)。 方法： 采用基于人群的病例．對(duì)照研究方法，以235例卵巢癌患者和246例健康對(duì)照個(gè)體為研究對(duì)象。235例癌患者為2001.12～2006.11于河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的北方籍漢族婦女。所有卵巢癌患者均經(jīng)組織病理學(xué)診斷為上皮性卵巢癌。采用2000年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的臨

4、床病理分期方法，將卵巢癌分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。246例正常對(duì)照為同一地區(qū)的健康漢族女性個(gè)體。 卵巢癌患者組與健康對(duì)照組人群在征得本人或其家屬同意后，無菌操作下采集外周靜脈血5ml，采用蛋白酶K-氯化鈉鹽析法提取基因組DNA。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restrictionfragment length polymorphism，PCR—RFLP)分析方法，檢測XP

5、D的多態(tài)性基因型。 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5版軟件包(SPSS Company，Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。比較各位點(diǎn)基因型頻率的觀察值與預(yù)期值并進(jìn)行卡方檢驗(yàn)行Hardy-Weinberg平衡分析。病例組與對(duì)照組的基因型分布比較采用行×列表卡方檢驗(yàn)。單體型頻率及連鎖不平衡分析采用EH軟件和2LD軟件(1.2 version，RockefellerUniversity，Ne

6、w York)。以非條件Logistic回歸法計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(odds ratio，OR)及其95％可信區(qū)間(confidence interval，CI) 結(jié)果： 1 XPD基因第10外顯子G/A SNP及第23外顯子A/C SNP基因型分布在健康對(duì)照組中均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。 2 XPD基因第10外顯子G/A SNP的G/G、G/A、A/A基因型頻率在卵巢癌患者組和健

7、康對(duì)照組中分別為80.9％、19.1％、0和85.0％、15.0％、0，因無A/A基因型的存在，將G/A與A/A基因型合并,兩組間比較基因型頻率分布無顯著性差異(P>0.05)。以G/G基因型為參照，G/A基因型不能增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.747，95％CI=0.464～1.205)。卵巢癌患者組和健康對(duì)照組的G、A等位基因頻率分別為90.4％、9.6％和92.5％、7.5％，兩組比較無顯著性差異(P>0.05)。 3

8、XPD基因第23外顯子A/C SNP的A.A、A/C、C/C基因型頻率在卵巢癌患者組和健康對(duì)照組中分別為77.9％、20.9％、1.2％和81.3％、18.3％、0.4％，兩組間基因型頻率分布無顯著性差異(P>0.05)。以A/A基因型為參照，A/C和C/C基因型與其相比不能增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)(OR=1.235．95％CI=0.792～1.927)。卵巢癌患者組和對(duì)照組的A、C等位基因頻率分別為88.3％、11.7％和90.4％、9.

9、6％兩組比較無顯著性差異(P>0.05)。 4 將卵巢癌患者按照病理類型分為四組，即漿液性卵巢癌、粘液性卵巢癌、宮內(nèi)膜樣卵巢癌及低分化腺癌。將XPD基因兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的基因型和等位基因型頻率在四個(gè)病理類型組的分布分別與正常對(duì)照組相比，發(fā)現(xiàn)XPD基因第23外顯子A/C SNP的等位基因型頻率在漿液性卵巢癌和正常對(duì)照間的分布存在一定的差異趨勢(shì)(X<'2>=3.629,P=0.057)，C等位基因?yàn)闈{液性卵巢癌的可疑危險(xiǎn)等位基因OR=1

10、.64，95％CI=0.903～2.979)。 5 將卵巢癌患者按FIGO分期分組后，XPD基因第10外顯子G/A SNP的基因型頻率在早期、晚期兩組人群中的分布無顯著性差異(X<'2>=2.03Z P=0.154)。XPD基因第23外顯子A/C SNP的基因型頻率在早期、晚期兩組人群中的分布有顯著性差異，即攜帶C等位基因(A/C或C/C)的個(gè)體更容易發(fā)生卵巢癌的浸潤和轉(zhuǎn)移(OR=2.205，95％CI=1.038～4.688，

11、P=0.037)。 6 應(yīng)用EH和2LD軟件對(duì)XPD基因第10外顯子G/A和第23外顯子A/C SNP位點(diǎn)進(jìn)行的聯(lián)合分析顯示，兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)間存在連鎖不平衡現(xiàn)象(D'=0.524386，X<'2>=104.17，P=0.00)，XPD基因第10外顯子的G等位基因易與第23外顯子的A等位基因連鎖。G/A單體型在人群中最常見，占83.7％。單體型分布在卵巢癌患者組與健康對(duì)照組間無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： 1

12、 XPD基因第10外顯子G/A和第23外顯子A/C SNP可能與中國北方漢族婦女上皮性卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)無關(guān)。但XPD基因第23外顯子A/C SNP的A、C等位基因型頻率在漿液性卵巢癌和正常對(duì)照組間的分布存在一定的差異趨勢(shì)，C等位基因可能為漿液性卵巢癌的可疑危險(xiǎn)等位基因。 2 XPD基因第23外顯子A/C SNP的基因型頻率在早期卵巢癌和晚期卵巢癌的分布存在顯著性差異，A/C、C/C基因型可能成為卵巢癌患者手術(shù)病理分期的一個(gè)分層標(biāo)