冷缺血時(shí)間對(duì)大鼠胰島分離純化的影響.pdf

1、目的：糖尿病是常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝疾病，其引發(fā)的多種并發(fā)癥嚴(yán)重危害人們的身心健康，只有建立內(nèi)源性胰島素分泌系統(tǒng)才能根治糖尿病。目前主要有胰腺移植和胰島移植兩種方法能達(dá)到此治療目的。雖然目前胰島移植對(duì)外源性胰島素依賴性的解除不如胰腺移植高，但與胰腺移植相比具有安全、簡(jiǎn)便、利于體外移植物修飾、不良反應(yīng)較低和可重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)，已成為很有發(fā)展前景的方法。成功的胰島移植需要多次移植足夠量的高質(zhì)量胰島。胰腺低溫保存的時(shí)間和獲得的胰島數(shù)目、活性有密切關(guān)系。

2、UW液是目前應(yīng)用最廣、最有效的胰腺保存液。臨床研究表明UW液在低溫下(4℃)保存供胰用于胰島移植不宜超過(guò)8-9小時(shí)。本實(shí)驗(yàn)用Uw液在4℃低溫下保存大鼠胰腺不同時(shí)間，研究冷缺血對(duì)獲得的胰島數(shù)目和質(zhì)量的影響。 材料與方法: 1、動(dòng)物及分組SD大鼠，雌雄不限，體重250-300g，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，根據(jù)實(shí)驗(yàn)大鼠的胰腺保存時(shí)間不同，隨機(jī)分為8組(0小時(shí)組，3小時(shí)組，6小時(shí)組，9小時(shí)組，12小時(shí)組，15小時(shí)組，18小時(shí)組，

3、21小時(shí)組)，每組5只大鼠。 2、胰島的獲取用UW液原位灌注大鼠胰腺后切取并放置于UW液中低溫保存。向大鼠胰管內(nèi)逆行灌注膠原酶溶液使胰腺充分膨脹，放在37±1℃水浴中振蕩消化12-15 min。終止消化后，兩次離心洗滌，經(jīng)80目不銹鋼篩過(guò)濾，F(xiàn)icoll梯度離心法純化胰島，濃度分別為25％、23％、20.5％和11％，從23％和20.5％之間交界處及20.5％和11％之間交界處吸取胰島、。 3、觀察指標(biāo) 獲取的胰

4、島用雙硫腙(DTZ)染色來(lái)計(jì)算分離胰島數(shù)目并判斷所提胰島的純度，丫啶橙/溴乙啶(AO/EB)熒光染色法顯示胰島細(xì)胞活率，體外葡萄糖刺激下胰島素釋放試驗(yàn)及兔抗鼠胰島素抗體免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)胰島活性。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析將所得數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采取方差分析q檢驗(yàn)，P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所有數(shù)據(jù)用SPSS11.5軟件處理。 結(jié)論: 1、UW液低溫保存大鼠胰腺6小時(shí)之內(nèi)獲得胰島的數(shù)量及質(zhì)量較好。 2、