雷帕霉素對大鼠肝臟冷缺血再灌注肺損傷的影響.pdf

1、目的:探討雷帕霉素對大鼠肝臟冷缺血再灌注肺損傷的影響及相關機制。
　　方法:健康雄性SD大鼠24只，8～10周齡，體重220～250 g，采用隨機數(shù)字表法，將其隨機分為3組:假手術組（S組）大鼠僅接受麻醉后開腹，游離肝葉及相關血管后關腹;模型對照組（C組）大鼠采用肝臟冷缺血再灌注模型，分別采用門靜脈插管和肝下下腔靜脈缺口作為灌注道和流出道，于腸系膜上靜脈上方和右腎靜脈上方阻斷門靜脈及肝下下腔靜脈，同時阻斷肝上下腔靜脈，用4℃乳酸林

2、格氏液經(jīng)門靜脈插管灌注肝臟，用吸引器及時吸凈肝下下腔靜脈缺口流出的血和灌注液，灌注過程中將包有紗布的冰塊置于肝臟表面維持低溫,20 min后隨即恢復肝臟血液灌注，沖洗腹腔后關腹;雷帕霉素組（R組）大鼠術前2w連續(xù)給予1 mg/kg/d雷帕霉素灌胃，手術操作同C組。于再灌注12 h時抽取下腔靜脈血樣，采用酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)測定血清中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6（IL-6）濃度。切取肺，取部分肺制成肺組織勻漿，

3、測定肺組織內(nèi)丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性。一部分肺組織分別采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)技術檢測誘導型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA及哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號通路蛋白的表達水平。另取部分肺組織用10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切成4μm薄片，行蘇木素-伊紅(HE)染色后于光學顯微鏡下觀察肺組織病理學結(jié)果。數(shù)據(jù)應用SPSS1

4、7.0統(tǒng)計軟件進行分析處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:與S組相比，C、R組血清中TNF-α、IL-6的濃度均升高(P＜0.05)，肺組織勻漿MDA、NO的含量升高及iNOS mRNA的表達上調(diào)，mTOR蛋白量表達增多，SOD活性降低（P＜0.05）;與C組相比，R組血清中TNF-α、IL-6的濃度均降低(P＜0.05)，肺組織勻漿MDA、NO的含量降低及iN

5、OS mRNA的表達下調(diào)，mTOR蛋白量表達減少，SOD活性升高(P＜0.05)。光鏡下S組肺組織形態(tài)結(jié)構未見明顯病理學改變，C組可見大量的炎性細胞浸潤，肺泡大小不一，肺泡間隔增寬，大量紅細胞滲出，毛細血管充血;R組損傷較輕，僅見少量炎性細胞浸潤，部分肺泡間隔增寬。
　　結(jié)論:1.大鼠肝臟冷缺血再灌注損傷能激活mTOR信號通路，恢復血流灌注后損傷明顯，氧化應激、炎癥反應及mTOR信號通路的激活在肝臟冷缺血再灌注肺損傷的發(fā)生過程中起