攜帶Ki67基因小發(fā)夾RNA的條件增殖型腺病毒治療膀胱癌荷瘤鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:研究攜帶Ki67基因小發(fā)夾RNA的條件增殖型腺病毒對(duì)膀胱癌荷瘤鼠的治療作用，為SiRNA-CRAds模式應(yīng)用于臨床膀胱癌治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:1.體外培養(yǎng)人膀胱癌BIU87細(xì)胞株，并建立裸鼠人膀胱癌移植瘤模型。2.移植瘤瘤體內(nèi)分別注射病毒ZD-Ki67、ZD-EGFP、Ad-Ki67及生理鹽水，病毒每次注射7×108PFU，連續(xù)注射三天。觀察移植瘤生長(zhǎng)情況，每周測(cè)量瘤體大小。3.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)移植瘤組織E1A及Ki

2、67蛋白表達(dá)。4.激光共聚焦顯微鏡下觀察移植瘤組織E1A及Ki67蛋白表達(dá)。5.TUNEL法檢測(cè)移植瘤組織凋亡情況。6.取裸鼠肝臟、肺臟行病理學(xué)檢測(cè)觀察移植瘤轉(zhuǎn)移情況。7.血清酶學(xué)檢測(cè)觀察腺病毒是否有肝毒性。 結(jié)果:1.成功建立裸鼠人膀胱癌移植瘤模型。2.瘤內(nèi)注射不同病毒9周后各種處理的腫瘤平均體積：生理鹽水處理組為2496.02mm3，Ad-Ki67處理組為1759.56mm3，ZD-EGFP處理組為1133.37mm3，而Z

3、D-Ki67處理組僅為128.51mm3。各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3.ElA蛋白免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在生理鹽水組與Ad-Ki67處理組無(wú)ElA蛋白的表達(dá)，而ZD-EGFP、ZD—Ki67處理組有大量ElA蛋白的表達(dá)。Ki67蛋白免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Ki67蛋白表達(dá)強(qiáng)弱依次為生理鹽水處理組(147.54±9.81)>ZD-EGFP處理組(105.88±9.62)>Ad-Ki67處理組(73.18±7.84)>

4、ZD-Ki67處理組(37.76±4.81)，各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。4.激光共聚焦顯微鏡下觀察，ElA蛋白檢測(cè)結(jié)果，ZD-Ki67及ZD-EGFP處理組示熒光陽(yáng)性，而Ad-Ki67和生理鹽水處理組示熒光陰性。Ki67蛋白檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：熒光強(qiáng)弱依次為：生理鹽水處理組>ZD-EGFP處理組>Ad-Ki67處理組>ZD-Ki67處理組。5.凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示：不同處理組移植瘤細(xì)胞凋亡陽(yáng)性率依次為：ZD-Ki67處理組平均

5、為(85.8±5.56)％；Ad-Ki67處理組平均為(61.4±3.84)％；ZD-EGFP處理組平均為(44.0±3.80)％；生理鹽水處理組平均為(15.8±3.19)％。各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。6.各處理組肝臟及肺臟HE染色切片顯示肝臟及肺臟均正常，未示有移植瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。7.血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果示各不同處理組裸鼠肝酶指標(biāo)均在正常范圍之內(nèi)，表明在本實(shí)驗(yàn)條件下病毒無(wú)明確肝毒性。 結(jié)論:條件增殖腺病毒ZD-Ki67