低劑量米非司酮對(duì)人植入窗期子宮內(nèi)膜自然殺傷細(xì)胞殺傷活性的影響.pdf

1、研究背景:正常妊娠時(shí),子宮內(nèi)膜對(duì)胚泡植入的接受存在一個(gè)短暫的植入窗口期——黃體生成激素(LH)峰后的7～11d,只有在此期才能順利完成胚胎著床,同時(shí)人娠是一種成功的同種半異體移植,著床中免疫問(wèn)題十分重要。母胎之間的免疫聯(lián)系是一種雙向交流模式,受兩方面的決定:胎兒抗原的暴露;母體系統(tǒng)對(duì)抗原的識(shí)別和應(yīng)答。因此,成功的植入有賴于子宮內(nèi)膜和胚胎的相互識(shí)別、耐受,甚至一個(gè)微小的紊亂或失調(diào)都會(huì)阻止植入的發(fā)生。母體免疫系統(tǒng)尤其是子宮內(nèi)膜局部的免疫細(xì)胞

2、能否識(shí)別并耐受胚胎抗原,直接影響妊娠的建立與維持,母體免疫系統(tǒng)對(duì)胚胎的免疫識(shí)別受T、B、自然殺傷(NK)細(xì)胞等一系列免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。NK細(xì)胞是先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分,尤其是在抗病毒、寄生蟲和微生物感染的早期免疫反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。子宮內(nèi)膜NK(uNK)細(xì)胞是子宮內(nèi)膜最重要的淋巴細(xì)胞,具有殺傷活性、分泌植入相關(guān)因子、控制滋養(yǎng)細(xì)胞侵入、改造螺旋動(dòng)脈以及維持母胎界面免疫平衡等作用。大量研究表明植入窗期子宮內(nèi)膜NK細(xì)胞數(shù)

3、量及活性的異常可能會(huì)導(dǎo)致植入失敗和習(xí)慣性流產(chǎn)。米非司酮(mifepristone,RU486)是人類合成的一種19-去甲類固醇,主要在受體水平上發(fā)揮作用。米非司酮是第一個(gè)用于臨床的孕激素受體拮抗劑,目前已廣泛應(yīng)用于抗早孕。20世紀(jì)90年代,國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道米非司酮廣泛用于臨床緊急避孕,且用藥劑量在逐步減少。近年來(lái),研究發(fā)現(xiàn)每日給予低劑量米非司酮,能阻止內(nèi)膜發(fā)育而起避孕作用,即所謂的“內(nèi)膜避孕”,對(duì)月經(jīng)周期影響少,無(wú)明顯副作用。本文利用體外

4、培養(yǎng)系統(tǒng),運(yùn)用免疫組化和四甲基偶氮唑鹽(MTT)技術(shù),研究低劑量米非司酮(分別為65 nmol/L、200 nmol/L)對(duì)人植入窗期子宮內(nèi)膜自然殺傷細(xì)胞殺傷活性的影響,以探討低劑量米非司酮作為抗著床避孕藥的免疫學(xué)機(jī)制。材料與方法:收集12例因輸卵管切除或丈夫不育,行IVF-ET婦女的子宮內(nèi)膜。入選婦女月經(jīng)史、生殖系統(tǒng)解剖、內(nèi)分泌等指標(biāo)均正常,近3個(gè)月內(nèi)無(wú)激素類藥物使用史,于月經(jīng)周期第20至24天取內(nèi)膜。每例內(nèi)膜分成三等份,給予不同處理

5、(分別為對(duì)照組、65 nmol/L組、200nmol/L組),組織培養(yǎng)24小時(shí)。采用MTT實(shí)驗(yàn)法,檢測(cè)低劑量米非司酮對(duì)人植入窗期uNK細(xì)胞殺傷活性的影響;上下兩張切片兩兩配對(duì)EnVision二步法染色,檢測(cè)低劑量米非司酮對(duì)植入窗期uNK細(xì)胞表達(dá)PFP的影響。結(jié)果:1.子宮內(nèi)膜組織塊體外培養(yǎng)前后形態(tài)學(xué)觀察:培養(yǎng)前后子宮內(nèi)膜均處于分泌中期,腺體、血管結(jié)構(gòu)均完整,間質(zhì)水腫無(wú)明顯改變。2.子宮內(nèi)膜NK細(xì)胞殺傷活性的變化三組子宮內(nèi)膜NK細(xì)胞殺傷活

6、性(％)分別為:對(duì)照組13.52±3.12,65nmol/L組22.33±4.53,200nmol/L組30.55±6.09。三組uNK細(xì)胞殺傷活性有顯著差異(P=0.01);兩實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組相比,顯著增高(P<0.05);兩實(shí)驗(yàn)組之間有顯著差異(P<0.05)3.子宮內(nèi)膜NK細(xì)胞表達(dá)PFP的變化PFP陽(yáng)性細(xì)胞著色為棕黃色,定位于胞漿;CD56陽(yáng)性為棕黃色,定位于胞膜。陽(yáng)性細(xì)胞主要分布在腺體和血管周圍的間質(zhì)(見圖2)。三組內(nèi)膜PFP

7、CD56陽(yáng)性細(xì)胞平均數(shù)分別為:對(duì)照組60±7,65nmol/L組80±6,200nmol/L組92±7。三組PFPCD56陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)有顯著差異(P=0.01);兩實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組相比,顯著增高(P<0.05);兩實(shí)驗(yàn)組之間有顯著差異(P<0.05)結(jié)論:1.低劑量米非司酮能增加植入窗期uNK細(xì)胞殺傷活性,提示低劑量米非司酮可能以此破壞了人植入窗期子宮內(nèi)膜局部免疫微環(huán)境的平衡。2.低劑量米非司酮能增加植入窗期PFP+CD56+陽(yáng)性細(xì)胞的