遹肺飲及其拆方對(duì)急性肺損傷后肺纖維化大鼠模型Smad2-3表達(dá)影響研究.pdf

1、目的:基于急性肺損傷后肺纖維化臨床和實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)合“肺氣主降，肺體喜潤(rùn)”的生理特性，提出該病以肺之氣陰兩虛為本，血瘀為標(biāo)的觀點(diǎn)。通過實(shí)驗(yàn)觀察遹肺飲及其拆方對(duì)急性肺損傷后肺纖維化大鼠模型Smad2/3表達(dá)的影響，依據(jù)“以方測(cè)證”理論，揭示及完善急性肺損傷后肺纖維化的病機(jī)變化，為制定急性肺損傷后肺纖維化規(guī)范的中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)、療效評(píng)定體系準(zhǔn)確量化及選方用藥標(biāo)準(zhǔn)提供建議，以便客觀地評(píng)定效果。
　　方法:實(shí)驗(yàn)采用博萊霉素-A5(BLM-A

2、5)氣管滴注法誘發(fā)急性肺損傷(ALI)后特發(fā)性肺纖維化(IPF) SD大鼠模型。108只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、補(bǔ)氣通絡(luò)組、養(yǎng)陰通絡(luò)組、祛瘀通絡(luò)組、遹肺飲組。對(duì)照組及模型組均灌服生理鹽水10ml/kg，補(bǔ)氣通絡(luò)組灌服補(bǔ)氣通絡(luò)方混懸液，5.2 g/kg體重;養(yǎng)陰通絡(luò)組灌服養(yǎng)陰通絡(luò)方混懸液，5.1g/kg體重;祛瘀通絡(luò)組灌服祛瘀通絡(luò)方混懸液，5.3 g/kg體重;遹肺飲組灌服遹肺飲方混懸液12.4 g/kg體重;各組均每日1次灌胃。通過

3、每日觀察大鼠的體重、飲食情況、精神狀態(tài)、反應(yīng)情況、外觀表征和糞便情況等進(jìn)行觀測(cè)，確定急性肺損傷后肺纖維化大鼠模型建立成功。造模后分別在第7天、第14天、第28天三個(gè)時(shí)間段將6組大鼠各隨機(jī)抓取6只進(jìn)行麻醉，股動(dòng)脈取血;右下肺組織置于4％中性甲醛固定，做石蠟切片，行HE與Masson染色、免疫組化染色;剩余組織液氮速凍，-70℃保存?zhèn)溆?，進(jìn)行Western-blot。
　　結(jié)果:
　　1.HE染色結(jié)果顯示:空白對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)清

4、晰，肺泡腔透亮，肺泡壁未見增厚，肺泡上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，肺間質(zhì)未見膠原沉積。模型組隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，其肺泡炎和肺泡纖維化程度明顯升高，7天時(shí)部分肺泡和毛細(xì)血管狹窄甚閉合，致肺組織實(shí)性改變，肺泡腔可見大量活化巨噬細(xì)胞，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞少見，肺間質(zhì)內(nèi)則出現(xiàn)大量的巨噬細(xì)胞及淋巴細(xì)胞炎性浸潤(rùn);14天時(shí)肺泡炎持續(xù)，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)亦較明顯，部分肺泡結(jié)構(gòu)消失，成纖維細(xì)胞增多并可見纖維組織增生，少量膠原沉積;28天時(shí)肺泡結(jié)構(gòu)萎陷，成纖維細(xì)胞大量增生，纖維

5、組織占據(jù)肺泡間隔及部分肺泡腔呈條索樣瘢痕改變，斑片狀分布。
　　2.Masson染色結(jié)果顯示:空白對(duì)照組在氣管及血管壁周圍可見少量藍(lán)色的膠原纖維沉積。模型組第7天時(shí)肺泡間隔及間質(zhì)內(nèi)有成纖維細(xì)胞，多集中在血管、小及細(xì)小支氣管周圍，并可見少量藍(lán)色膠原纖維沉積;第14天時(shí)肺泡間隔明顯增寬，肺血管、氣道壁、肺泡間隔及間質(zhì)內(nèi)膠原纖維沉積明顯增加;第28天時(shí)肺間質(zhì)沉積大片狀或條索狀的膠原纖維，肺泡融合及實(shí)變，典型的肺纖維化改變。
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6、.免疫組化及Western-blot結(jié)果顯示:肺組織中Smad2/3和TGF-β在第14和28天均持續(xù)高表達(dá)，且第14天表達(dá)最高。
　　4.對(duì)急性肺損傷后肺纖維化模型大鼠給予藥物干預(yù)后，補(bǔ)氣通絡(luò)組、養(yǎng)陰通絡(luò)組、祛瘀通絡(luò)組、遹肺飲組大鼠仍存在肺纖維化病理形態(tài)學(xué)的逐步進(jìn)展性改變，但程度明顯輕于模型組。肺組織中Smad2/3和TGF-β1表達(dá)的趨勢(shì)與模型組類似，但其含量均高于空白對(duì)照組而低于模型組(P＜0.05)。
　　結(jié)論: