IL-18在肺纖維化大鼠肺內(nèi)的表達(dá)與作用研究.pdf

1、目的：1.檢測(cè)白細(xì)胞介素．18(interleukin,IL-18)在博萊霉素(BLM)誘導(dǎo)大鼠肺纖維化模型中的表達(dá)；2.體外分離培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞，研究重組大鼠白細(xì)胞介素18(rrlL-18)對(duì)肺成纖維細(xì)胞的作用及機(jī)制，以探討IL-18在肺纖維化的形成和發(fā)展進(jìn)程中所起的作用。 方法：1.健康雌性SD大鼠60只，隨機(jī)分兩組，每組30只。實(shí)驗(yàn)組：氣管內(nèi)一次性注入生理鹽水稀釋的BLM(5mg·kg-1)；對(duì)照組：氣管內(nèi)注入生理鹽水

2、(0.2～0.3ml)。于給藥后第1、3、7、14、28天用過量氯胺酮腹腔注射的方法隨機(jī)處死實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組大鼠各6只。無菌操作下取出大鼠肺組織，RT-PCR法檢測(cè)肺組織中IL-18 mRNA表達(dá)，免疫熒光法檢測(cè)肺組織IL-18蛋白的表達(dá)及定位；2.體外分離培養(yǎng)新生大鼠肺成纖維細(xì)胞，RT-PCR法檢測(cè)正常肺成纖維細(xì)胞IL-18的基因表達(dá)；采用MTr法檢測(cè)rrIL-18對(duì)成纖維細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響；半定量RT-PCR法檢測(cè)rrIL-18干預(yù)前

3、后成纖維細(xì)胞中Ⅲ型膠原蛋白、TNF-a、MMP9、IL-13的表達(dá)變化。 結(jié)果：1.肺纖維化模型復(fù)制成功；IL-18基因表達(dá)相對(duì)灰度值在造模后不同時(shí)期與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，各個(gè)時(shí)期之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01.)。在肺纖維化形成過程中，實(shí)驗(yàn)組中的IL-18的基因和蛋白表達(dá)呈現(xiàn)出如下趨勢(shì)：自BLM注入后第1天開始迅速升高，至第7天到達(dá)高峰，以后逐漸下降，但第28天仍高于正常。在對(duì)照組肺泡上皮細(xì)胞、

4、肺泡巨噬細(xì)胞和小血管內(nèi)皮細(xì)胞中有少量表達(dá)，在纖維化肺組織的大多數(shù)細(xì)胞中表達(dá)顯著增高，且纖維化嚴(yán)重區(qū)域較多成纖維細(xì)胞也呈陽(yáng)性反應(yīng)。 2.成功培養(yǎng)大鼠肺成纖維細(xì)胞；正常細(xì)胞未檢測(cè)到IL-18 mRNA表達(dá)，但I(xiàn)L-18能促進(jìn)肺成纖維細(xì)胞增殖，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IL-18干預(yù)早期顯著增強(qiáng)成纖維細(xì)胞表達(dá)Ⅲ型膠原、TNF-a mRNA，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；IL-18不能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞表達(dá)MM