以HBC和HPV16L1為載體的流感通用疫苗研究.pdf

1、背景知識(shí)：
　　流感（Influenza）是由流行性感冒病毒（Influenzavirus）感染引起的急性呼吸道傳染病。流感病毒屬于正粘病毒科，可感染人和多種動(dòng)物。流感病毒抗原性易發(fā)生變異，抗原的漂移和轉(zhuǎn)換給流感的防治帶來了較大困難。接種疫苗仍然是預(yù)防和控制流感的主要手段。目前使用的疫苗包括全病毒疫苗、裂解疫苗和減毒活疫苗，但都需要每年更換疫苗株接種。因此，發(fā)展流感通用疫苗，實(shí)現(xiàn)幾年接種免疫一次是流感疫苗研究發(fā)展的方向。
　

2、　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建以乙肝核心蛋白（HBC）和人乳頭瘤病毒主要衣殼蛋白（HPV16L1）為載體的甲型流感病毒M2基因胞外區(qū)（M2e）通用疫苗桿粒，利用昆蟲細(xì)胞桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，進(jìn)行初步的蛋白表達(dá)，為發(fā)展安全、有效、穩(wěn)定的流感通用疫苗奠定基礎(chǔ)。
　　方法與結(jié)果：
　　1．將甲型流感病毒M2e基因序列設(shè)計(jì)在引物上，利用PCR技術(shù)分別與HBC和HPV16L1相連。將M2e-HBC和M2e-HPV16L1序列分別克隆到供體

3、質(zhì)粒pFastBacHTA上，構(gòu)建兩個(gè)重組質(zhì)粒，分別為M2e-HBC-pFastBacHTA和M2e-HPV16L1-pFastBacHTA。
　　2．用E.coliDH10Bac中的穿梭載體Bacmid與重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)座，使含有M2e-HBC和M2e-HPV16L1基因的表達(dá)盒插入Bacmid的attTn7的接受位點(diǎn)，獲得重組Bacmid。
　　3．將挑選的陽性重組子DNA轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞，取上清和細(xì)胞，上清繼續(xù)擴(kuò)增病毒，用空斑

4、試驗(yàn)測(cè)定病毒效價(jià)；免疫熒光法檢測(cè)蛋白表達(dá)；細(xì)胞做破胞處理后，將上清和裂解液進(jìn)行SDS-PAGE分析；將感染病毒的細(xì)胞裂解后透射電鏡觀察。結(jié)果證明，M2e-HBC和M2e-HPV16L1基因有蛋白表達(dá)，而對(duì)照呈現(xiàn)陰性；電鏡可見細(xì)胞內(nèi)病毒樣顆粒（VLP）形成。
　　結(jié)論：
　　構(gòu)建了含有M2e-HBC和M2e-HPV16L1的桿粒。利用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)，將構(gòu)建好的桿粒轉(zhuǎn)染sf9昆蟲細(xì)胞，得到含有重組桿狀病毒的