以細(xì)胞凋亡為佐劑效應(yīng)的新型DNA疫苗載體研究.pdf_第1頁(yè)
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1、  本課題主要從誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的視角,提出了具有佐劑效應(yīng)的RNA分子與抗原蛋白共表達(dá)的全新思路,對(duì)DNA疫苗載體的優(yōu)化策略進(jìn)行了探索。以SFV為代表的甲病毒復(fù)制子載體是目前DNA疫苗研究的一個(gè)熱點(diǎn)。這類載體借助高水平的轉(zhuǎn)錄和免疫激活功能獲得了比傳統(tǒng)的DNA疫苗載體更高的抗原呈遞和免疫激活效率[1]。但是基于SFV復(fù)制子的DNA疫苗的免疫效果受到基因表達(dá)設(shè)計(jì)等因素的影響,仍存在很大的優(yōu)化空間。體外研究表明,SFVC蛋白mRNA編碼區(qū)5’-端

2、102bp是一個(gè)翻譯增強(qiáng)區(qū),對(duì)其下游編碼序列的翻譯有一定的增強(qiáng)作用[2,3]。但是在基于甲病毒復(fù)制子的DNA疫苗中引入該翻譯增強(qiáng)區(qū)對(duì)于疫苗的免疫原性的影響尚未見報(bào)道。因此,我們對(duì)表達(dá)HIVGag抗原的SFV復(fù)制子DNA疫苗進(jìn)行了改造,在gag基因5’端融合了SFVC蛋白的翻譯增強(qiáng)區(qū),并對(duì)該序列對(duì)抗原表達(dá)和疫苗免疫原性的影響進(jìn)行探討。試驗(yàn)結(jié)果表明,衣殼蛋白5’翻譯增強(qiáng)區(qū)增強(qiáng)了Gag表達(dá)和特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答水平,但對(duì)體液免疫應(yīng)答沒有顯著影響

3、?! ∥覀儑L試選擇一個(gè)簡(jiǎn)單有效的凋亡刺激信號(hào)作為小分子佐劑應(yīng)用于DNA疫苗。國(guó)外研究者曾對(duì)能夠在體外激活PKR(dsRNA依賴性蛋白激酶)的RNA分子結(jié)構(gòu)作了大量的基礎(chǔ)性研究工作,而PKR是與病毒感染誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和IFN抗病毒效應(yīng)密切相關(guān)的一個(gè)重要的媒介分子[5]。因此,我們?cè)诂F(xiàn)有的疫苗載體pDRVI1.0上引入能夠轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生特殊結(jié)構(gòu)的87nt單鏈RNA的表達(dá)盒,并分析該表達(dá)盒對(duì)細(xì)胞凋亡和DNA疫苗免疫效率的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,本研究

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