調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與肝癌肝移植術(shù)后免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤免疫相關(guān)性研究.pdf

1、高水平表達(dá)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(RegulatoryT Cell，Treg)有助于肝移植(LiverTransplantation，LT)術(shù)后免疫耐受的誘導(dǎo)，對肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)肝移植術(shù)后患者，則可增加腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和降低長期生存率，因而此類患者術(shù)后免疫耐受的誘導(dǎo)與腫瘤復(fù)發(fā)的預(yù)防互為矛盾。目前廣泛應(yīng)用的他克莫司(Tacrolimus，F(xiàn)K506)具有促進(jìn)腫瘤復(fù)發(fā)的作用，而mTOR抑制劑西羅莫司(Si

2、rolimus，SRL)可替代這一不良反應(yīng)。面對肝移植術(shù)后高復(fù)發(fā)率的巨大壓力，目前無公認(rèn)防治策略，尋找可維持免疫抑制并同時(shí)抗腫瘤復(fù)發(fā)的聯(lián)合治療方案尤為重要。因而本研究以SRL為主的聯(lián)合免疫治療方案(Sirolimus CombinedTherapeutic Regimen，SCTR)又稱三聯(lián)抗腫瘤療法(Triple Anti-tumor Therapy,TATT)為干預(yù)措施，分析Treg對肝癌移植受者機(jī)體免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤免疫的作用，并進(jìn)

3、一步探討此方案對HCC患者LT預(yù)后生存的價(jià)值。本研究論文分三部分進(jìn)行討論。
　　第一部分:肝移植受者分類與Treg細(xì)胞亞群表達(dá)差異
　　肝癌及肝癌移植術(shù)后復(fù)發(fā)患者體內(nèi)FoxP3+Treg表達(dá)水平顯著高于正常組(P＜0.05)。肝硬化肝移植患者術(shù)后FoxP3+Treg維持在接近正常水平(P＞0.05)，而肝癌肝移植未復(fù)發(fā)及長期存活患者FoxP3+Treg維持在較低水平(P＜0.05)，二者均未不增加排斥反應(yīng)發(fā)生率;對肝癌肝移植

4、患者術(shù)后FoxP3+Treg經(jīng)歷先降低至低谷水平，而后早期逐漸提升到較高水平（與正常及肝硬化移植受者無明顯差異），6個(gè)月開始逐漸降低，至術(shù)后1年開始維持在與SCTR干預(yù)組長期存活相近水平(P＜0.05);我們認(rèn)為，在肝硬化肝移植患者術(shù)后較高水平的FoxP3+Treg（接近正常水平）有助于機(jī)體長期維持免疫抑制作用，同時(shí)對機(jī)體細(xì)胞免疫功能影響較小，并不增加排斥反應(yīng)發(fā)生率;與之相比，SCTR方案干預(yù)可有效下調(diào)肝癌肝移植受者外周血FoxP3+T

5、reg細(xì)胞的表達(dá)，在產(chǎn)生與之強(qiáng)度相當(dāng)?shù)拿庖咭种仆瑫r(shí)，維持機(jī)體足夠數(shù)量的CD8+T效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤細(xì)胞免疫功能，達(dá)到抗腫瘤復(fù)發(fā)的作用，因而我們認(rèn)為這種較低水平的FoxP3+Treg有助于移植肝的長期生存同時(shí)又可降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。
　　第二部分:模擬肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)特點(diǎn)的動(dòng)物模型體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)與抗腫瘤免疫相關(guān)性分析
　　以化學(xué)-誘癌法建立模擬肝癌肝移植術(shù)后復(fù)發(fā)的特點(diǎn)動(dòng)物模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采外周血，處死各組大鼠，肉眼可見模型

6、組肝臟顆粒狀結(jié)節(jié)，最大者10mm，HE染色提示HCC，藥物干預(yù)組病變明顯減輕，以TATT組顯著。模型對照組大鼠外周血FoxP3+Treg水平顯著高于正常組及藥物干預(yù)組(P＜0.05)，TATT干預(yù)卻可顯著降低FoxP3+Treg的水平(P＜0.05);各單藥干預(yù)下，F(xiàn)oxP3+Treg水平雖有所下降，組間無明顯差異(P＞0.05)。肝臟和脾臟組織中，除模型對照組水平顯著低于外周血水平(P＜0.05)外，其余各組變化與外周血基本一致。Tr

7、eg抑制效應(yīng)方面，外周血、肝臟和脾臟CD4+、CD8+T細(xì)胞的數(shù)量降低以模型對照組最顯著(P＜0.05)，TATT干預(yù)可顯著增加CD4+、CD8+T的數(shù)量，接近正常水平(P＞0.05)，顯著高于各單藥組和模型對照組(P＜0.05);且與CD4+T、CD8+T和CD4+/CD8+T的表達(dá)負(fù)相關(guān)。在抗原提呈和識(shí)別方面，TATT可顯著提高機(jī)體樹突狀細(xì)胞(Dendritic Cell，DCs)的表達(dá)水平，與模型對照組和單藥干預(yù)組相比，差異具有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與體內(nèi)FoxP3+Treg細(xì)胞表達(dá)相反。
　　HCC相關(guān)指標(biāo)方面，模型對照組大鼠AFP水平顯著高于正常水平(P＜0.05)，藥物干預(yù)則可降低AFP的表達(dá)，以TATT組變化最為明顯(P＜0.05);模型組大鼠外周血VEGF水平顯著升高(P＜0.05)，且肝癌組織免疫組化染色VEGF表達(dá)顯著增加(P＜0.05)，TATT藥物干預(yù)效果顯著，VEGF表達(dá)顯著低于正常水平、模型對照組和單藥干預(yù)組(P＜0.05)。<

9、br>　　綜上，在模擬免疫抑制環(huán)境下，TATT干預(yù)可顯著抑制肝癌細(xì)胞的生長或癌變進(jìn)程，可顯著延長大鼠的死亡時(shí)間，降低死亡率(P＜0.05)，認(rèn)為TATT干預(yù)可能主要通過有效降低機(jī)體FoxP3+Treg表達(dá)并維持在較低狀態(tài)，削弱對效應(yīng)T細(xì)胞的直接和間接抑制作用，增加抗原提呈細(xì)胞CD11c+DCs的表達(dá)，抑制FoxP3+Treg的增殖，進(jìn)一步增強(qiáng)機(jī)體效應(yīng)T細(xì)胞對腫瘤抗原的提呈、識(shí)別，殺傷以及監(jiān)視作用，發(fā)揮抑制癌細(xì)胞生長和增殖的作用。

10、　　第三部分:SCTR方案在肝癌肝移植術(shù)后移植物長期生存中的價(jià)值研究
　　回顧性隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn)，超UCSF標(biāo)準(zhǔn)肝癌肝移植受者接受SCTR方案治療，隨訪至2015年03月分析發(fā)現(xiàn)，SCTR治療可顯著延長患者生存時(shí)間（1、3年總生存率和無瘤生存率100％vs.94.4％），延緩腫瘤復(fù)發(fā)，同時(shí)顯著降低FoxP3+Treg細(xì)胞水平，并維持AFP在正常水平，提示SCTR/TATT方案可作為HCC患者LT術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的防治有效選擇;術(shù)后FoxP