細胞色素P450氧化還原酶基因多態(tài)性對其mRNA及活性的影響.pdf

1、研究背景:
　　細胞色素P450氧化還原酶(Cytochrome P450 oxidoreductase，POR)是存在于人肝微粒體中內質網(wǎng)膜上的一種黃素蛋白質。它傳遞電子給所有的微粒體細胞色素P450酶，進而實現(xiàn)個體對藥物、致癌物等的代謝作用。目前還沒有正常肝功能的中國人肝樣本POR的詳細報道。
　　目的:
　　本研究檢測POR基因多態(tài)性、POR mRNA表達水平及POR活性，并分析POR基因多態(tài)性對POR mRNA

2、表達水平及POR活性的影響。分析POR mRNA表達水平與POR活性的相關性及POR基因多態(tài)性對POR mRNA與POR活性相關性的影響。另外，分析人口學因素對POR mRNA、POR活性及兩者相關性的影響，提供POR的生理數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　POR基因多態(tài)性通過SnapShort進行分型分析。POR活性通過測定人肝微粒體中細胞色素C的還原來檢測。POR mRNA表達水平通過熒光定量PCR方法測定，并以2-△Ct計算擴增

3、結果。
　　結果
　　123例人肝樣本POR基因8種SNP位點分型結果顯示:POR基因SNP位點(rs17148944G＞A、 rs2302433C＞T、 rs1057868 C＞T、rs41301394C＞T、rs1135612A＞G、rs10954732G＞A、rs4732515T＞C、rs4732516C＞G)突變率分別為0.8％、6.9％、34.1％、34.1％、48.8％、50.8％、86.2％、86.2％。本研究

4、樣本中POR mRNA表達水平為0.047-1.25，差異26.6倍，中位數(shù)是0.28。125例正常肝功能的中國人每毫克微粒體中POR活性水平為26.91-125.77nmol/mgprotein/min，差異4.67倍，其中位數(shù)為56.05 nmol/mg protein/min。另外，125例正常肝功能的中國人每克肝組織中POR活性水平為215-12323nmol/gliver/min，差異57.23倍，其中位數(shù)為2152 nmol

5、/g liver/min。
　　通過兩種方法分析POR基因多態(tài)性分別對POR mRNA及POR活性的影響。首先，逐一分析POR基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)對POR活性的影響，沒有發(fā)現(xiàn)明顯影響(P＞0.05)。然后，根據(jù)8種SNP，對POR基因進行單倍型分析，將123例樣本分為14種單倍型，分析兩兩單倍型間的人肝中POR活性的差異性。結果顯示:以每毫克微粒體為單位表示POR活性時，單倍型7(n=7)和單倍型8(n=8)相比，有4個S

6、NP不同(rs1057868、rs41301394、rs4732515、rs4732516)，導致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有顯著差異(P=0.008)。單倍型1(n=24)與單倍型7(n=7)相比，有4個SNP不同(rs1057868、rs10954732、rs1135612、rs41301394)，導致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有明顯差異(P=0.011)。單倍型8(n=8)和單倍型10(n=36)相比，

7、有3個SNP不同(rs1135612、rs4732515、rs4732516)，導致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有明顯差異(P=0.015)。單倍型10(n=36)與單倍型1（n=24）相比，有4個SNP不同(rs1057868、rs10954732、rs1135612、rs41301394)，導致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有明顯差異(P=0.028)。同樣，單倍型6與單倍型11，單倍型8與單倍型11，單倍型1

8、與單倍型11，單倍型6與單倍型8等兩兩基因型間每毫克微粒體中POR活性相比時，都表現(xiàn)出明顯差異(P＜0.05)。而以每克肝組織為單位表示POR活性時，只發(fā)現(xiàn)單倍型7(n=7)分別與單倍型1(n=24)、單倍型6(n=6)相比時，每克肝組織中POR活性有明顯差異(P＜0.05)。同樣分析14種單倍型樣本兩兩間POR mRNA表達水平的差異性。結果顯示:單倍型3分別與單倍型1、單倍型7、單倍型8、單倍型10相比時，POR mRNA表達水平具

9、有明顯差異(P＜0.05)。
　　另外，分析POR mRNA與POR活性的總相關性，并分析POR基因多態(tài)性對POR mRNA與POR活性相關性的影響。結果顯示:POR基因rs1057868位的基因型為TT純合子突變的樣本(n=11)，POR mRNA與POR活性明顯相關(r=0.675，P=0.023)。POR基因rs41301394位的基因型為TT純合子突變的受試者(n=11)，POR mRNA與POR活性明顯相關（r=0.67

10、5，P=0.023）。單倍型8(rs1057868-rs4732516: TC-G-A-G-C-CT-TC-CG)(n=6)的POR mRNA與POR活性明顯相關(r=0.885，P=0.019)。
　　人口學因素分析結果顯示，年齡、性別對POR活性沒有明顯影響，吸煙(P=0.044)和飲酒(P=0.013)明顯降低POR活性。而年齡、性別、吸煙、飲酒對POR mRNA表達水平均沒有影響。男性的POR mRNA表達水平與POR活性

11、明顯相關(r=0.384，P=0.036)，吸煙的樣本POR mRNA表達水平與POR活性明顯相關(r=0.658，P=0.028)。
　　結論:
　　1.POR基因突變明顯影響POR mRNA表達水平及POR活性。
　　2.吸煙和飲酒明顯降低POR活性。
　　3.POR mRNA表達水平與POR活性總體沒有明顯相關性。
　　4.男性的PORmRNA表達水平與POR活性明顯相關(r=0.384，P=0.03