沙棘籽渣黃酮對糖、脂代謝的調(diào)控及機理探討.pdf

1、沙棘(Hippophae rhanmoides L.)系胡頹子科(Elaeagnaceae)沙棘屬植物，不僅具有良好的改良土壤和水土保持功能，而且有很高的藥用價值。沙棘籽渣是沙棘籽榨油后的殘渣，也是沙棘初級利用后的棄物，沙棘籽渣黃酮(flavonoidsfrom seed residues of Hippophae rhamnoides L.，F(xiàn)SH)是其所含的生物活性成分之一。課題組前期研究顯示FSH具有干預(yù)糖、脂代謝異常的生物學(xué)活性

2、，本文在此基礎(chǔ)之上，通過觀察FSH對脂肪細胞糖代謝及分化的影響，結(jié)合高脂飲食小鼠模型，進一步探討了FSH調(diào)節(jié)糖、脂代謝的作用機理及靶點。
　　 研究首先分離大鼠脂肪細胞，通過檢測細胞葡萄糖消耗量，對實驗室?guī)追N植物有效成分進行了篩選，結(jié)果顯示FSH促進大鼠脂肪細胞消耗葡萄糖的作用最為明顯，200～1000μg/mL的FSH均可顯著促進脂肪細胞消耗葡萄糖，并且FSH與胰島素聯(lián)合作用時，細胞葡萄糖消耗量顯著高于胰島素單獨作用。

3、　　 根據(jù)上述結(jié)果，實驗進一步觀察了FSH對3T3-L1脂肪細胞糖代謝的影響。結(jié)果顯示，10～1000μg/mL的FSH對前脂肪細胞消耗葡萄糖的能力無明顯影響，但200～800μg/mL的FSH能顯著促進經(jīng)誘導(dǎo)分化成熟的脂肪細胞消耗葡萄糖。同時FSH在200μg/mL濃度下可有效提高GLUT4 mRNA的表達，提示FSH可能通過上調(diào)GLUT4 mRNA的表達來促進脂肪細胞消耗葡萄糖。
　　 另外，通過油紅O染色和甘油三酯含量測

4、定觀察FSH干預(yù)脂肪細胞分化的程度。結(jié)果顯示，50和100μg/mL的FSH能夠顯著降低油紅O洗脫液吸光度值，25、50和100μg/mL的FSH可使脂肪細胞內(nèi)甘油三酯含量顯著降低，說明FSH能夠抑制3T3-L1脂肪細胞的分化。同時，MTT實驗結(jié)果顯示，5～100μg/mL的FSH可對3T3-L1前脂肪細胞的增殖產(chǎn)生抑制作用。
　　 以上細胞試驗結(jié)果表明，F(xiàn)SH具有促進脂肪細胞消耗葡萄糖，抑制脂肪細胞分化及前脂肪細胞增殖的作用，

5、提示脂肪細胞可能是FSH發(fā)揮作用的潛在靶細胞，F(xiàn)SH在體內(nèi)的降糖調(diào)脂活性可能是通過對脂肪細胞功能的調(diào)節(jié)而實現(xiàn)的。為進一步驗證和探尋FSH發(fā)揮藥效的作用途徑，本研究利用高脂飲食小鼠模型觀察FSH對模型鼠糖、脂代謝的影響并探索其作用機理及靶點。結(jié)果顯示：連續(xù)灌胃FSH(50、100和150 mg/kg劑量)12 w，與高脂對照組相比，模型小鼠體重、肝臟系數(shù)、附睪處脂肪墊系數(shù)下降，但平均飲食量和飲水量、心臟系數(shù)、脾臟系數(shù)、腎臟系數(shù)無明顯變化；

6、血清TC、LDL-C、LDL-C/TC和血糖水平降低，HDL-C/TC升高，口服糖耐量得到改善，而胰島素水平和胰島素敏感指數(shù)無顯著性變化。FSH處理組小鼠肝臟TC、TG含量降低，透射電鏡觀察顯示FSH組小鼠肝細胞中脂滴數(shù)量減少，而骨骼肌中TC、TG含量無明顯變化。此外，F(xiàn)SH組小鼠肝臟LPL和HL活性及骨骼肌LPL活性均無顯著性差異，而脂肪組織LPL活性顯著降低。同時，F(xiàn)SH組小鼠肝臟GSH-PX和SOD活性提高，GSH、MDA和T-A

7、OC無明顯變化。根據(jù)上述實驗結(jié)果并結(jié)合細胞試驗，推測肝臟和脂肪組織可能是FSH發(fā)揮藥效作用的主要靶組織，因此試驗進一步檢測了肝臟和脂肪組織中與糖、脂代謝相關(guān)基因表達的變化。結(jié)果顯示，與高脂對照組相比，F(xiàn)SH組小鼠肝臟組織中LDLR和PPARα mRNA表達量增加，G-6-Pase mRNA表達下降，并且低劑量的FSH(50 mg/kg)能夠增加GK mRNA的表達。在脂肪組織中，高劑量的FSH(150 mg/kg)提高了GLUT4和PP

8、ARγmRNA的表達，另外，F(xiàn)SH降低IRS-2 mRNA表達，但能不同程度的增加IR mRNA和PI3K、Akt蛋白的表達。
　　 綜上所述，F(xiàn)SH能夠降低高脂飲食小鼠的血脂血糖水平，肝臟和脂肪組織是FSH調(diào)節(jié)糖、脂代謝的主要靶組織。FSH提高肝臟LDLR和PPARα mRNA的表達可能是FSH調(diào)節(jié)血脂水平的部分機理，而FSH對前脂肪細胞增殖和分化的抑制作用可能是其減輕體重的關(guān)鍵機制。FSH的降血糖作用一方面可能與降低肝臟G-