血小板CD154對內(nèi)皮細胞TF、TFPI表達的影響.pdf

1、目的：采用人臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVECs)與人血小板共孵育的方法從多方面(分子水平、蛋白水平)來探討內(nèi)皮細胞CD40-血小板CD154信號途徑對內(nèi)皮細胞表達組織因子(tissue factor,TF)和其抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)的影響。 方法：從正常人外周血中通過密度梯度離心的方法分離血小板，用

2、ADP誘導(dǎo)血小板活化，并通過流式細胞術(shù)(FCM)檢測血小板活化前后CD154表達的變化。同時將靜息或ADP誘導(dǎo)活化的血小板分別作用于培養(yǎng)的臍靜脈內(nèi)皮細胞，以未經(jīng)刺激的HUVECs作為陰性對照，LPS(5μg/ml)刺激的HUVECs作為陽性對照。采用RT-PCR及流式細胞術(shù)(FCM)等方法檢測臍靜脈內(nèi)皮細胞TF和TFPI的表達。另外，為了驗證血小板CD154-內(nèi)皮細胞CD40之間的相互作用對TF和TFPI表達的影響，本實驗分別在血小板與

3、內(nèi)皮細胞共同培養(yǎng)前加入CD154單抗或者CD40單抗以阻斷活化血小板CD154或內(nèi)皮細胞CD40的作用。所有的數(shù)據(jù)采用SPSS13.0進行分析。 結(jié)果：①血小板與ADP作用后，血小板表面CD154的表達明顯升高，同對照組相比差異有顯著性(t=11.1，P<0.01)。②經(jīng)ADP活化的血小板與HUVECs共孵育后，HUVECs表達TF mRNA(t=32.3，P<0.01)以及膜表面蛋白都顯著增高(t=13.76，P<0.01)；

4、而且特異性CD40(F=124.415,P<0.01)或CD154(F=144.134,P<0.01)單克隆抗體能部分阻斷上述作用，其分別和活化血小板組以及陰性對照組比較，三者之間有統(tǒng)計學(xué)差異；靜息血小板(t=2.27,P=0.08)或單純ADP(t=0.23,P=0.83)對HUVECs表達TF沒有影響。③不同狀態(tài)血小板和應(yīng)用CD40或CD154單克隆抗體以及單純ADP均不影響HUVECs TFPI的表達(F=1.36,P=0.295

5、)。 結(jié)論：①體外誘導(dǎo)血小板活化可使其表面表達CD154，靜息血小板表達極低，因此CD154可作為血小板活化標(biāo)志物之一。②活化血小板通過CD40-CD154信號通路可誘導(dǎo)HUVECs表達TF，而且，該效應(yīng)能被CD40或CD154單克隆抗體部分抑制。③血小板CD154-內(nèi)皮細胞CD40信號途經(jīng)TFPI的表達無影響。由此推測活化血小板可能通過自身表達的CD154與內(nèi)皮細胞CD40相互作用介導(dǎo)外源性凝血途徑激活，從而參與動脈粥樣硬化斑