活化血小板對內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞介素IL-1β和IL-6表達(dá)的影響.pdf

1、目的： 通過分析血小板受ADP誘導(dǎo)劑活化后對體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株表達(dá)炎癥細(xì)胞因子白介素IL-1β和IL-6的影響，探討活化血小板在炎癥反應(yīng)性疾病中的作用。 方法： 1.取30例健康人外周血，根據(jù)Ahnadi CE等<'[1]>的方法制備血小板懸液，用最終濃度為0.8μmol/l的ADP與血小板作用20min，誘導(dǎo)血小板活化。用Advia120血細(xì)胞分析儀檢測各樣本ADP處理前后血小板平均內(nèi)含物濃度(MPC

2、)的變化，評價血小板活化水平。 2.復(fù)蘇冰凍的ECV304人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)株，傳代培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長良好時，吸去培養(yǎng)液進(jìn)行血小板刺激實驗。采集健康人外周血制備成混合血小板懸液，分以下四個實驗組：(1)活化血小板組：終濃度為0.8μmol/l的ADP與血小板室溫下作用20 min后再與HUVECs共同孵育。(2)靜息血小板組：血小板懸液室溫下靜置20 min后與HUVECs共同孵育。(3)ADP對照組(4)空白細(xì)胞對

3、照組。各組細(xì)胞在5％CO<,2> 37℃條件下孵育12小時，用TRNzol提取總RNA，再以RT-PCR技術(shù)檢測內(nèi)皮細(xì)胞白介素IL-1β和IL-6mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.最終濃度為0.8μmol/l的ADP刺激血小板20min前后MPC水平經(jīng)配對t檢驗，t=32.24，P<0.01，差別有顯著性，說明該實驗條件可在體外刺激血小板活化。 2.活化的血小板與HUVECs共同培養(yǎng)后，可刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)炎癥細(xì)胞因子