腎素-血管緊張素系統(tǒng)基因多態(tài)性及ALK7對(duì)動(dòng)脈硬化影響的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 Meta分析:腎素一血管緊張素系統(tǒng)基因多態(tài)性對(duì)動(dòng)脈硬化的影響
　　研究背景:
　　隨著人口老齡化及醫(yī)學(xué)技術(shù)的更新，動(dòng)脈硬化的發(fā)病率不斷上升。動(dòng)脈硬化(Arterial Stiffness)與心血管疾病的發(fā)病率和死亡率密切相關(guān)，是心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。脈搏波傳導(dǎo)速度(Pulse Wave Velocity，PWV)是評(píng)價(jià)動(dòng)脈硬化的金標(biāo)準(zhǔn)，被廣泛應(yīng)用于患者的血管危險(xiǎn)分層的

2、評(píng)估中。
　　腎素-血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin System，RAS)的過(guò)度激活在動(dòng)脈硬化的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。RAS阻斷藥物，如血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑可以抑制血管平滑肌增生，增加管壁的順應(yīng)性，改善動(dòng)脈的彈性功能。RAS各個(gè)組分的基因多態(tài)性在人群中廣泛存在。近來(lái)一系列研究發(fā)現(xiàn)，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因I/D多態(tài)性(ACE I/D polymorphism)，血管緊張素Ⅱ1型受體基因A11

3、66C多態(tài)性(AGTR1 A1166C polymorphism)和血管緊張素原基因M235T多態(tài)性(AGT M235T polymorphism)可能通過(guò)影響血管的結(jié)構(gòu)和功能來(lái)影響動(dòng)脈僵硬度。這些發(fā)現(xiàn)可能為動(dòng)脈硬化風(fēng)險(xiǎn)的早期預(yù)測(cè)及抗動(dòng)脈硬化的個(gè)體化治療提供的新的證據(jù)。然而，目前關(guān)于RAS基因多態(tài)性對(duì)動(dòng)脈硬化的影響存在爭(zhēng)議，RAS基因多態(tài)性檢測(cè)是否真正具有臨床應(yīng)用價(jià)值尚有待研究。
　　研究目的:
　　以PWV為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用

4、Meta分析的方法，評(píng)價(jià)ACE I/D多態(tài)性，AGTR1A1166C多態(tài)性和AGT M235T多態(tài)性對(duì)動(dòng)脈硬化的影響。
　　研究方法:
　　我們通過(guò)系統(tǒng)的電子檢索方法在PubMed，EMBASE, Cochrane Library和Web of Science中檢索ACE I/D多態(tài)性，AGTR1 A1166C多態(tài)性和AGT M235T多態(tài)性與PWV關(guān)系的文章，檢索日期截止于2014年10月17日。根據(jù)相應(yīng)的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)選

5、擇合適研究納入Meta分析。兩個(gè)評(píng)審員獨(dú)立查閱評(píng)價(jià)這些研究并從中提取數(shù)據(jù)，包括研究人群的基本特征，人群的基因型分布和不同基因型患者的PWV。采用Revman5.2軟件和STATA11.0軟件進(jìn)行Meta分析。
　　研究結(jié)果:
　　共有11篇文章被納入分析，其中6篇涉及ACE I/D多態(tài)性(n=4687)，7篇涉及AGTR1 A1166C多態(tài)性(n=1687)，2篇涉及AGTM235T多態(tài)性(n=3507)。Meta分析結(jié)果顯

6、示:在總體人群和歐洲人群中，ACE I/D多態(tài)性，AGTR1 A1166C多態(tài)性和AGT M235T多態(tài)性與PWV都沒(méi)有顯著相關(guān)性。在亞洲人中，ACE I/D多態(tài)性和AGTR1 A1166C多態(tài)性與PWV具有顯著相關(guān)性。等位基因Ⅰ可顯著升高PWV（顯性模型ID+DD vs.Ⅱ:SMD=-0.31，95％ CI:-0.51～-0.12，P=0.001;隱性模型DD vs.ID+Ⅱ: SMD=-0.39，95％ CI:-0.68～-0.09

7、，P=0.01;共顯性模型DD vs.Ⅱ: SMD=-0.55,95％ CI:-0.87～-0.23, P＜0.001; ID vs.Ⅱ:SMD=-0.25,95％CI:-0.45～-0.05，P=0.01）。等位基因C的攜帶者PWV顯著高于AA基因型(AC+CCvs.AA: SMD=0.33，95％ CI:0.06～0.60，P=0.02)。另外，動(dòng)脈硬化高風(fēng)險(xiǎn)人群中，等位基因Ⅰ純合子的PWV顯著高于等位基因D的雜合子及其攜帶者(ID

8、 vs.Ⅱ:SMD=-0.25,95％ CI:-0.46～-0.05,P=0.02, I2=40％; ID+DD vs.Ⅱ:SMD=-0.38,95％CI:-0.72～-0.03, P=0.03, I2=59％)。
　　結(jié)論:
　　我們的研究提示了ACE I/D多態(tài)和AGTR1 A1166C多態(tài)可能與亞洲人的動(dòng)脈硬化相關(guān)。等位基因Ⅰ和等位基因C可能是亞洲人群PWV升高的危險(xiǎn)因素。本研究未發(fā)現(xiàn)AGT M235T多態(tài)性與PWV具

9、有顯著相關(guān)性。但需要更多高質(zhì)量大樣本研究來(lái)進(jìn)一步驗(yàn)證這些結(jié)論。
　　第二部分：ALK7基因沉默改善2型糖尿病大鼠主動(dòng)脈硬化的研究
　　研究背景:
　　糖尿病大血管病變是糖尿病患者高病死率的主要原因。動(dòng)脈硬化是糖尿病大血管并發(fā)癥的主要特征。動(dòng)脈血管細(xì)胞外基質(zhì)成分改變，尤其是血管彈性纖維與膠原纖維代謝異常是動(dòng)脈硬化的重要病理機(jī)制。然而，目前關(guān)于糖尿病動(dòng)脈硬化的分子病理學(xué)機(jī)制仍不甚清楚。
　　活化素受體樣激酶7(ALK

10、7)是Ⅰ型轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)受體家族成員。研究證實(shí)ALK7參與了多種細(xì)胞增殖、分化和凋亡的調(diào)控。Smad2/3是ALK7重要的下游信號(hào)分子，在血管緊張Ⅱ和晚期糖基化終產(chǎn)物等纖維化因子引起的組織膠原沉積中起關(guān)鍵作用。
　　因此，我們推測(cè)，2型糖尿病狀態(tài)下，主動(dòng)脈中ALK7過(guò)表達(dá)，并可能通過(guò)調(diào)控Smad2/3信號(hào)通路影響糖尿病主動(dòng)脈硬化。但目前尚未見(jiàn)類似研究報(bào)道。
　　研究目的:
　　建立2型糖尿病大鼠模型，并通

11、過(guò)ALK7-siRNA特異性抑制大鼠體內(nèi)ALK7基因的表達(dá)來(lái)探討ALK7在糖尿病主動(dòng)脈硬化發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制，為糖尿病動(dòng)脈硬化治療提供新的潛在靶點(diǎn)。
　　研究方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)分組:正常對(duì)照組(Control)、糖尿病組(DM)、糖尿病+腺病毒空載體組(DM+Vehicle)和糖尿病+ALK7-shRNA腺病毒干預(yù)組(DM+ALK7-shRNA)。
　　2.以高脂飲食喂養(yǎng)及腹腔注射27.5mg/kg STZ誘導(dǎo)建

12、立2型糖尿病大鼠模型。DM+ALK7-shRNA組和DM+Vehicle組大鼠分別給予ALK7-shRNA腺病毒或空載體干預(yù)。
　　3.采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清總膽固醇水平.(TC)、甘油三酯(TG)和血糖水平(FBG)及空腹胰島素(FINS)水平。
　　4.利用大鼠尾動(dòng)脈血壓測(cè)量?jī)x監(jiān)測(cè)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均動(dòng)脈壓(MBP)和心率(HR)。
　　5.采用Verhoeff染色、H&E染色、Mas

13、son三色染色和天狼猩紅染色，檢測(cè)主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)特征及硬化程度。
　　6.采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)主動(dòng)脈中膜測(cè)膠原Ⅰ和膠原Ⅲ表達(dá)。
　　7.通過(guò)Western blot方法檢測(cè)大鼠主動(dòng)脈中膜ALK7的表達(dá)和Smad2，Smad3磷酸化水平。
　　研究結(jié)果:
　　1.DM組大鼠的TC，TG和FBG水平明顯增高，ISI明顯降低，ALK7基因沉默后，高脂血癥和胰島素抵抗明顯改善。
　　2.Verhoeff, H

14、E，Masson及天狼猩紅染色顯示:DM組大鼠主動(dòng)脈中膜結(jié)構(gòu)紊亂，膠原纖維與彈性纖維含量比值(C/E)增加。ALK7基因沉默改善管壁組織結(jié)構(gòu)紊亂，減輕血管硬化。
　　3.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示:DM組大鼠的膠原Ⅰ及膠原Ⅲ表達(dá)增加，膠原Ⅰ/Ⅲ增加，ALK7基因沉默改善Ⅰ、Ⅲ膠原沉積及膠原比例。
　　4.Western blotting顯示:DM組大鼠主動(dòng)脈中的ALK7，P-Smad，P-Smad3的表達(dá)明顯增加，ALK7基因