CNTF在青光眼大鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)變化及對純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:（1）建立青光眼動物模型眼為進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ)；（2）探討青光眼大鼠視網(wǎng)膜中睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)的變化；（3）研究睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子對純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞活性和突起再生的影響。 方法:（1）采用電凝大鼠鞏膜表面靜脈及角膜周圍血管的方法建立慢性高眼壓性青光眼動物模型；（2）在模型建立后1 天、7 天和28 天獲取視網(wǎng)膜，采用免疫組化的方法探測睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子在視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)的變化；（3）取新生1～3天大鼠視網(wǎng)膜，胰

2、酶消化并用細(xì)胞篩純化，接種于多聚鳥氨酸包被的96孔培養(yǎng)板，隨機(jī)分為5組，24小時(shí)細(xì)胞貼壁后，換液時(shí)分別加入不含睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子及含10ng?ml-1、20ng?ml-1、30ng?ml-1、40ng?ml-1睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的5種培養(yǎng)液，于加入含睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子培養(yǎng)液后第1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天、15天以四甲基偶氮唑鹽比色法測定不同濃度的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子對純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞總體活性的影響，計(jì)數(shù)在400倍相差

3、顯微鏡和熒光顯微鏡下神經(jīng)節(jié)細(xì)胞突起數(shù)。 結(jié)果:（1）在正常大鼠視網(wǎng)膜中，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子主要表達(dá)于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，在青光眼大鼠視網(wǎng)膜中，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)增加，不僅表達(dá)于視網(wǎng)膜的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層，內(nèi)核層、外核層中均出現(xiàn)表達(dá)；（2）加入含睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子培養(yǎng)液后第1～7天，加入高濃度的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞總體活性較高，至第7天，各組總體活性均有顯著性差異（p<0.05），第13～15天，40 ng?ml-1的

4、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子對比20 ng?ml-1、30 ng?ml-1的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子提高純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞總體活性的作用有下降趨勢(p<0.05)。加入CNTF后3～5d，40 ng?ml-1組突起率顯著高于對照組（P<0.05）。7～15d，20 ng?ml-1、30 ng?ml-1、40 ng?ml-1組突起率顯著高于對照組（P<0.05），30 ng?ml-1、40 ng?ml-1組突起率顯著高于10 ng?ml-1、20

5、ng?ml-1組（P<0.05）。 結(jié)論:（1）用前述方法成功建立了慢性青光眼動物模型；（2）青光眼動物模型建立后7～28天，視網(wǎng)膜中睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子除在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層表達(dá)外，內(nèi)核層、外核層也出現(xiàn)表達(dá)；（3）睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子有明顯的提高純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞總體活性的作用，1～7天內(nèi)睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子的濃度和純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞總體活性有量效關(guān)系，13～15天40 ng?ml-1的睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子提高純化培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)