缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的RNA干擾聯(lián)合經(jīng)動脈化療栓塞治療肝癌的實驗研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1α）的RNA干擾聯(lián)合經(jīng)動脈化療栓塞治療肝癌的實驗研究姓名：陳呈世申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：王建華20120401復(fù)旦大學(xué)博士論文中文摘要McARH7777細(xì)胞中，可以通過RNA干擾的方法敲低HIF1a的表達。關(guān)鍵詞：缺氧誘導(dǎo)因子1；肝細(xì)胞肝癌；慢病毒；RNA干擾第二部分缺氧誘導(dǎo)因子1Q的RNA干擾減低缺氧肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力目的：本研究探索慢病毒調(diào)節(jié)的HIF

2、—la的RNA干擾在缺氧的條件下能否敲低HIF1a的表達和進一步抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達，能否抑制HCC細(xì)胞的增殖，侵襲和遷移能力。方法：應(yīng)用慢病毒構(gòu)建HIF1a的RNA干擾載體感染大鼠肝癌細(xì)胞系McARH7777，在正常氧條件和缺氧的條件下進行不同時間段的培養(yǎng)。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和免疫印跡分別檢測HIF1a和VEGF的RNA和蛋白表達水平。通過細(xì)胞活性實驗，Transwell遷移和侵襲實驗分別檢測細(xì)胞的增殖，遷移和侵

3、襲能力。結(jié)果：反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)分析結(jié)果：在常氧條件下，HIF1etRNA干擾分別使McARH7777細(xì)胞中HIF1et和VEGF的mRNA表達水平減低7694％和5372％。在缺氧條件下，在HIF1a和VEGF的mRNA表達水平最高時，對照組細(xì)胞HIF1a和VEGF的mRNA表達水平分別是RNA干擾組細(xì)胞的383倍和290倍。HIF1a和VEGF的mRNA表達在RNA干擾組和對照組的相關(guān)系數(shù)分別是O84和O83，HIFla和VEGF無

4、論是在RNA干擾組還是在對照組都顯著相關(guān)(p005)。HIF1etRNA干擾顯著抑制缺氧誘導(dǎo)的HIF1et和VEGFmRNA的升高。免疫印跡分析結(jié)果：在HIF1QRNA干擾的細(xì)胞內(nèi)HIF1a的蛋白量在常氧條件和缺氧6小時的條件下分別是對照組細(xì)胞的o10倍和o18倍。在HIF一1QRNA干擾的細(xì)胞內(nèi)VEGF的蛋白表達量在常氧條件和缺氧6小時的條件下分別是對照組細(xì)胞的O7l倍和O47倍。HIF1QRNA干擾顯著抑制缺氧誘導(dǎo)的HIF1Ⅱ和VE