人IGF-Ⅱ基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)在肝癌中的作用及意義.pdf

1、　　目的 通過(guò)分析原發(fā)性肝癌、癌旁肝組織、慢性乙型肝炎組織、正常肝組織中人胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài),探討其演變?cè)诟伟┌l(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的作用。
　　方法采集手術(shù)切除的肝癌及配對(duì)的癌旁肝組織12例、慢性乙型肝炎肝穿刺活檢組織10例、正常肝組織7例,均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)；培養(yǎng)三株肝癌細(xì)胞系(BEL7402、SMMC7721、HepG2)及胎肝細(xì)胞系L02；提取基因組DNA為模板,巢式PCR擴(kuò)增IGF-Ⅱ基因啟動(dòng)子(

2、P1、P2、P3、P4),肝癌組織IGF-Ⅱ啟動(dòng)子擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序；甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶HpaⅡ和不敏感的限制性內(nèi)切酶MspⅠ消化基因組DNA,酶切產(chǎn)物為模板,擴(kuò)增IGF-Ⅱ基因啟動(dòng)子；亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA,甲基化特異性PCR(MSP)檢測(cè)各啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)。
　　結(jié)果肝癌組織IGF-Ⅱ啟動(dòng)子序列與MEDLINE提供的正常序列(NT009308)一致；75%HCC(9/12)、67%癌旁肝組織(8/12)和細(xì)胞系的IGF-

3、Ⅱ啟動(dòng)子P1甲基化,而慢性乙型肝炎組織、正常肝組織只有20%(2/10)、14%(1/7)；所有肝癌組織、癌旁肝組織和細(xì)胞系P3不同程度去甲基化,慢性乙型肝炎組織、正常肝組織分別為40%(4/10)和29%(2/7)；所有肝癌組織、癌旁肝組織和細(xì)胞系P4不同程度去甲基化,慢性乙型肝炎組織為10%(1/10)、正常肝組織14%(1/7)；不同組織間P2甲基化率無(wú)差異；正常肝組織、慢性乙型肝炎組織間各啟動(dòng)子甲基化率無(wú)差異；IGF-Ⅱ啟動(dòng)子甲

4、基化狀態(tài)與肝癌分化程度、腫瘤大小無(wú)關(guān)。
　　結(jié)論HCC發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中IGF-Ⅱ基因啟動(dòng)子活性異常可能與基因缺失、突變無(wú)關(guān)；肝癌組織、癌旁肝組織、肝癌細(xì)胞系、胎肝細(xì)胞系IGF-Ⅱ基因啟動(dòng)子P1甲基化,P3、P4去甲基化,可能是肝癌IGF-Ⅱ基因成人型啟動(dòng)子P1失活和胚胎型啟動(dòng)子P3、P4激活的原因；HBV感染與IGF-Ⅱ啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)無(wú)關(guān)；肝癌IGF-Ⅱ基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)與其分化程度、腫瘤大小無(wú)關(guān)。因此IGF一Ⅱ基因啟動(dòng)子甲基