絕緣子HS4的不同區(qū)域?qū)τ跅U狀病毒基因表達(dá)的影響.pdf

1、關(guān)于病毒感染和復(fù)制過程中的表觀遺傳學(xué)調(diào)控多集中于具有潛伏期的病毒，如Epstein-Barr病毒(EBV)，單純皰疹病毒(HSV)或是乙型肝炎病毒(HBV)，而對于裂解性復(fù)制病毒相關(guān)研究則比較少。在本實驗室之前的研究發(fā)現(xiàn)插入在桿狀病毒polyhedrin位點下游的雞β球蛋白絕緣子HS4(hypersensitive site4)可以顯著提高polyhedrin啟動自控制的報告基因的表達(dá)水平。本研究進(jìn)一步探索了絕緣子HS4的不同區(qū)域在桿狀

2、病毒裂解性復(fù)制過程中對于基因表達(dá)的調(diào)控。
　　絕緣子HS4是位于雞β球蛋白基因座5'端上游20kb處的一段序列，具有阻斷增強子和屏蔽異染色質(zhì)擴散的作用。通常認(rèn)為其發(fā)揮功能依賴于位于5'端的250bp核心區(qū)，其中CTCF區(qū)負(fù)責(zé)增強子的阻斷，而USF區(qū)可以招募USF1/2因子并進(jìn)一步招募組蛋白乙?；傅纫跃S持周圍染色體的乙?；苊猱惾旧|(zhì)的擴散。然而也有研究指出核心區(qū)域及3'端400bp區(qū)域?qū)τ诎l(fā)揮絕緣子的作用都是必須的。
　

3、　在本研究中，首先通過PCR獲得了HS4絕緣子的不同區(qū)域，分別將其插入桿狀病毒polyhedrin啟動子帶動報告基因egfp表達(dá)框的下游。共構(gòu)建了6株重組病毒，分別為帶有HS45'端核心區(qū)域250bp的vBGc，敲除5'端核心區(qū)域和3'端區(qū)域的vBG550，帶有5'端核心區(qū)域與3'端區(qū)域連接片段的vBG650，敲除5'端核心區(qū)域的vBG950，全長HS4的vBG'，以及作為對照未插入任何HS4片段的vGFP。通過熒光顯微鏡觀察和流式細(xì)胞