綿羊肺腺瘤病自然病例和人工感染病例的臨床病理學(xué)及分子病理學(xué)研究.pdf

1、綿羊肺腺瘤病(sheeppulmonaryadenomatosis，SPA)是由β型反轉(zhuǎn)錄病毒引起的一種腫瘤性傳染病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為B類疾病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部列為三類疾病。 本研究在對(duì)內(nèi)蒙古某市種羊場(chǎng)綿羊肺腺瘤病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，選擇2個(gè)SPA自然病例帶回實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行臨床癥狀觀察、血液學(xué)檢查、X線檢查、病理剖檢、病理組織學(xué)和超微病理學(xué)觀察。同時(shí)用含JSRV-NM株的SPA肺腫瘤組織無細(xì)胞濾液0.3ml氣管內(nèi)接種1日齡

2、羔羊7只，經(jīng)18個(gè)多月的系統(tǒng)觀察，對(duì)存活下來的4只人工感染羊，也進(jìn)行了同上的系統(tǒng)臨床病理學(xué)研究。本研究還分別提取2只自然感染羊、4只JSRV-NM株人工感染羊、6只健康對(duì)照羊的肺組織基因組DNA，根據(jù)JSRV-NM株病毒基因組全序列，采用PrimerPremier5.0引物設(shè)計(jì)軟件，在env基因。TM區(qū)和LTRU3區(qū)序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物，利用PCR方法，檢測(cè)自然感染和人工感染SPA病羊肺腫瘤組織中JSRV的前病毒DNA。同時(shí)，對(duì)自然病例和人

3、工感染病例，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血中單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化以及淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞凋亡情況。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1)2只自然感染綿羊均出現(xiàn)了SPA典型的臨床癥狀，“小推車試驗(yàn)”陽性，脈搏和呼吸頻率高于正常，貧血，X線胸透發(fā)現(xiàn)病羊肺部有不同程度的云絮狀實(shí)變區(qū)。(2)剖檢可見，肺臟體積增大，表面和切面上有大小不一、質(zhì)度較實(shí)的黃白色小結(jié)節(jié)，有些病例肺胸膜的臟層與壁層發(fā)生粘連，支氣管、細(xì)支氣管內(nèi)可見白色泡沫狀黏液。(3

4、)病理組織學(xué)檢查，肺泡壁上皮細(xì)胞和細(xì)支氣管上皮細(xì)胞增生，呈乳頭狀向肺泡腔內(nèi)或細(xì)支氣管腔內(nèi)生長(zhǎng)，鄰近肺泡腔內(nèi)有大量脫落的上皮細(xì)胞。(4)透射電鏡觀察，病羊肺泡壁上皮細(xì)胞被大量腫瘤化的立方狀上皮細(xì)胞取代，有些細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)有明顯的板層小體，證明腫瘤細(xì)胞主要來源于Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞。(5)4只人工感染綿羊均出現(xiàn)了一些SPA臨床癥狀。剖檢、組織學(xué)檢查以及透射電鏡觀察，人工感染JSRV-NM株病羊所引起的主要病變及其性質(zhì)，和SPA自然病例的病變

5、及其性質(zhì)相似。(6)2只SPA自然病羊PCR檢測(cè)結(jié)果都為陽性，而2只健康對(duì)照羊PCR檢測(cè)結(jié)果都為陰性；4只JSRV-NM株人工感染病例PCR檢測(cè)結(jié)果都為陽性，而4只健康對(duì)照羊PCR檢測(cè)結(jié)果都為陰性。(7)2個(gè)自然病例、4個(gè)人工感染病例，外周血中CD2+、CD4+、CD8+T細(xì)胞表現(xiàn)為暫短的升高，其后迅速下降，之后可反復(fù)出現(xiàn)起伏；而在JSRV的持續(xù)作用下，病羊體內(nèi)的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度的凋亡和壞死。 本項(xiàng)研究是國(guó)內(nèi)首次進(jìn)