心肌肥厚、肥厚-逆轉(zhuǎn)和慢性心力衰竭心肌中PKCε信號復合物的蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、第一部分大鼠壓力負荷型心肌肥厚、肥厚-逆轉(zhuǎn)及慢性心力衰竭模型的建立及相關(guān)問題探討 [目的]探討壓力負荷型心肌肥厚(POH)、肥厚-逆轉(zhuǎn)(POH-Re)、慢性心力衰竭(HF)模型的建立方法及其評價體系。 [方法]8w齡SD雄性大鼠隨機分入2組：腹主動脈縮窄組(AAC)和假手術(shù)組(sham)。AAC組大鼠以1％戊巴比妥麻醉后行腎上腹主動脈縮窄術(shù)，sham組大鼠同樣麻醉、開腹、游離腹主動脈，但主動脈只掛線不結(jié)扎。兩組動物術(shù)后常

2、規(guī)使用抗生素3天。術(shù)后12w，所有大鼠行超聲心動圖測定，根據(jù)超聲心動圖測得的左室重量/體重(LVmass/BW)比值，AAC組大鼠中凡LVmass/BW升高者隨機分入心肌肥厚組(POH-NF，n=20)、逆轉(zhuǎn)組(POH-Re，n=12)、心衰組(POH-F，n=29)，進行不同處理：POH-NF組處死取材；POH-Re組以福辛普利(Squibb，10mg/kg/day)和卡維地洛(Roche，0.5mg/kg/day)灌胃8w后處死取材

3、；POH-F組給予高鹽飲食12w后處死取材。所有動物取材前先行超聲心動圖測定，再經(jīng)頸動脈插入心導管行血流動力學測定，最后取材，稱心、肺濕重，并作心、肺組織形態(tài)學觀察。 [結(jié)論]通過AAC法成功建立了大鼠POH模型，在此基礎上，給予長期過度鈉負荷建立了CHF模型，而應用ACEI+β阻滯劑聯(lián)合干預成功逆轉(zhuǎn)了POH。用超聲心動圖、血流動力學、心肺重量指數(shù)、鏡下心、肺組織形態(tài)學和癥狀觀察作為一個系統(tǒng)的評價體系，能較好地區(qū)分小動物實驗中的

4、心肌肥厚和心力衰竭。 第二部分心肌肥厚、肥厚-逆轉(zhuǎn)和慢性心力衰竭心肌中PKCε信號復合物的蛋白質(zhì)組學研究 [目的]探討壓力負荷型心肌肥厚(POH)、肥厚-逆轉(zhuǎn)、慢性心力衰竭(HF)過程中心肌PKCε的變化趨勢，并分析、比較、鑒定不同病程中心肌PKCε信號復合物成分的改變，探尋PKCε參與心肌肥厚和心衰的可能作用機制，為防治心肌肥厚和心衰提供新的理論依據(jù)和治療靶點。 [方法]通過對8w齡SD雄性大鼠行腹主動脈縮窄術(shù)

5、(AAC)建立POH模型，同齡的假手術(shù)組大鼠作為對照組。術(shù)后12w，根據(jù)超聲測得的左室重量指數(shù)(LVmass/BW)結(jié)果，AAC組大鼠被隨機分入心肌肥厚組(POH-NF，n=20)、逆轉(zhuǎn)組(POH-Re，n=12)、心衰組(POH-F，n=29)，進行不同處理：POH-NF處死取材；POH-Re以福辛普利、卡維地洛灌胃8w后處死取材；POH-F給予高鹽飲食12w后處死取材。所有動物在取材前均需行超聲心動圖和血流動力學測定，取材后留取部分

6、心、肺組織作形態(tài)學觀察。然后對這三組動物的心臟左室組織進行WesternBlot分析，發(fā)現(xiàn)不同病變階段PKCε的變化趨勢。同時，三組動物心臟左室勻漿分別與PKCε抗體免疫共沉淀，從而分離出相應的PKCε復合物。得到的免疫共沉淀產(chǎn)物依次行雙向電泳和質(zhì)譜分析，比較這些PKCε復合物的成分和含量，鑒定有意義的差異蛋白質(zhì)，最后用免疫共沉淀和WesternBlot方法證實這些差異蛋白質(zhì)存在于PKCε復合物中。 [結(jié)論]PKCε通過形成不同