Wnt3a-β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路在Survivin誘導(dǎo)心力衰竭心肌細(xì)胞凋亡抵抗中的作用.pdf

1、研究背景:
　　心力衰竭是多種心血管疾病的終末階段，具有高死亡率、高費(fèi)用、高致殘率等特點(diǎn)，給個(gè)人和社會(huì)帶來(lái)極大的負(fù)擔(dān)。心室重構(gòu)是心力衰竭的重要病理變化，心肌細(xì)胞凋亡是心室重構(gòu)的關(guān)鍵機(jī)制之一，如何拮抗心肌細(xì)胞凋亡，逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)便成了治療心力衰竭的指導(dǎo)方向。Wnt/β-catenin作為經(jīng)典wnt信號(hào)通路，現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)其參與了心肌細(xì)胞的肥大、凋亡過(guò)程，wnt3a作為wnt家族的一員，在心肌細(xì)胞中的作用機(jī)制復(fù)雜。survivin作為抗凋

2、亡蛋白，已有研究發(fā)現(xiàn)survivin在心衰心肌細(xì)胞中具有保護(hù)作用，但其上游信號(hào)尚不清楚。
　　研究目的:
　　1、研究Wnt3a、β-catenin、 survivin在心衰大鼠模型心肌細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn);
　　2、研究Wnt3a、β-catenin、survivin在體外正常心肌細(xì)胞及DOX誘導(dǎo)的心衰細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)及相互作用關(guān)系;
　　3、研究過(guò)表達(dá)wnt3a、survivin及干擾wnt3a在心衰細(xì)胞凋亡過(guò)程

3、中的作用，并分析其可能的作用機(jī)制。
　　研究方法:
　　1、將21只大鼠隨機(jī)分為三組，手術(shù)組、假手術(shù)組及空白組。手術(shù)組采用胸主動(dòng)脈縮窄法制作心衰大鼠模型，假手術(shù)組開(kāi)胸不結(jié)扎，空白組不做任何處理。所有大鼠定期檢測(cè)心臟超聲，待手術(shù)組心衰形成后處死所有動(dòng)物，取心肌組織標(biāo)本，行HE染色、免疫組化檢測(cè)、western blot相關(guān)蛋白檢測(cè);
　　2、構(gòu)建過(guò)表達(dá)wnt3a、過(guò)表達(dá)survivin、干擾wnt3a的腺病毒，在體外培養(yǎng)

4、原代心肌細(xì)胞，采用阿霉素(DOX)誘導(dǎo)法建立心衰細(xì)胞模型，分別轉(zhuǎn)染不同腺病毒并設(shè)置對(duì)照組。用western blot法檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)，用TUNEL法研究過(guò)表達(dá)wnt3a、過(guò)表達(dá)survivin、干擾wnt3a在心衰細(xì)胞凋亡過(guò)程中的作用。
　　研究結(jié)果:
　　1、手術(shù)組大鼠術(shù)后18周心衰形成。心肌組織HE染色結(jié)果可見(jiàn)手術(shù)組心肌細(xì)胞肥厚，排列紊亂，部分心肌細(xì)胞核大小不均勻，部分偏向一側(cè)。免疫組化及westernblot結(jié)果可見(jiàn)

5、wnt3a、β-catenin、survivin及caspase-3在手術(shù)組的表達(dá)高于其余兩組，特別是survivin與caspase-3在手術(shù)組表達(dá)遠(yuǎn)高于其他兩組，Bcl-2在手術(shù)組的表達(dá)低于其余兩組;
　　2、分析細(xì)胞轉(zhuǎn)染后western blot檢測(cè)相關(guān)蛋白結(jié)果，過(guò)表達(dá)wnt3a與干擾wnt3a無(wú)論在正常心肌細(xì)胞還是DOX誘導(dǎo)形成的心衰細(xì)胞中均沒(méi)有體現(xiàn)出對(duì)survivin表達(dá)的影響。過(guò)表達(dá)survivin在正常心肌細(xì)胞未表現(xiàn)

6、出對(duì)wnt3a的影響，但在DOX誘導(dǎo)的心衰細(xì)胞中，過(guò)表達(dá)survivin減弱了DOX對(duì)wnt3a表達(dá)的抑制作用。過(guò)表達(dá)survivin在正常心肌細(xì)胞體現(xiàn)了促進(jìn)β-catenin表達(dá)的作用，在DOX誘導(dǎo)的心衰細(xì)胞中未見(jiàn)明顯影響。過(guò)表達(dá)Wnt3a及survivin在正常心肌細(xì)胞均可以促進(jìn)Bcl-2的表達(dá)，過(guò)表達(dá)survivin在DOX誘導(dǎo)的心衰細(xì)胞中可以減弱DOX對(duì)Bcl-2表達(dá)的抑制作用，過(guò)表達(dá)wnt3a沒(méi)有體現(xiàn)相似的作用。過(guò)表達(dá)Wnt3

7、a及survivin在正常心肌細(xì)胞均體現(xiàn)了抑制caspase-3表達(dá)的作用，同時(shí)在DOX誘導(dǎo)的心衰細(xì)胞中都減弱了DOX對(duì)caspase-3表達(dá)的促進(jìn)作用，干擾wnt3a則體現(xiàn)了相反的結(jié)果;
　　3、過(guò)表達(dá)wnt3a和過(guò)表達(dá)survivin都具有抗DOX誘導(dǎo)的心衰細(xì)胞凋亡的作用，干擾wnt3a則作用相反。
　　研究結(jié)論:
　　1、心衰大鼠心肌中wnt3a、β-catenin、survivin表達(dá)上升可能是一種機(jī)體自我保護(hù)