玻璃化冷凍前熱應(yīng)激處理對小鼠卵母細(xì)胞影響的初步研究.pdf

1、目的:以熱應(yīng)激處理后小鼠MⅡ期卵母細(xì)胞熱休克蛋白70的表達(dá)特點(diǎn)，及對熱應(yīng)激處理后進(jìn)行玻璃化冷凍的卵母細(xì)胞存活率及細(xì)胞骨架的完整性進(jìn)行綜合分析,探討熱應(yīng)激處理小鼠MⅡ期卵母細(xì)胞對玻璃化冷凍的影響。
　　方法:以小鼠卵母細(xì)胞(MⅡ期)為研究對象，隨機(jī)分為：新鮮對照組、玻璃化冷凍組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組。⑴使用免疫熒光及Western-blotting方法測定并分析小鼠成熟卵子及熱休克處理后 HSP70的表

2、達(dá)特點(diǎn)及規(guī)律；⑵采用玻璃化冷凍方法保存熱休克處理后的小鼠MⅡ卵子，對復(fù)溫后卵子的存活率、細(xì)胞骨架（紡錘體和染色體）的完整性進(jìn)行觀察和分析。
　　結(jié)果:HSP70免疫熒光結(jié)果顯示:新鮮對照組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組中蛋白信號主要均勻分布在胞質(zhì)中，在染色體區(qū)無明顯分布。熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組相比,胞質(zhì)內(nèi)HSP70信號密度下降。WB結(jié)果顯示：熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜

3、黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組比較，HSP70的表達(dá)下降，無明顯差異（P＞0.05），熱休克處理后玻璃化冷凍組與姜黃素處理后玻璃化冷凍組無明顯差異（P>0.05）。玻璃化冷凍后卵母細(xì)胞存活率：玻璃化冷凍組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組相比較，卵母細(xì)胞的存活率均顯著降低（P<0.05），熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組的卵母細(xì)胞存活率較玻璃化冷凍組，無明顯差異（P＞0.05）。細(xì)胞骨

4、架分析：玻璃化冷凍組、熱休克處理后玻璃化冷凍組及姜黃素處理后玻璃化冷凍組與新鮮對照組相比較，細(xì)胞骨架正常率均降低，有明顯差異（P<0.01）；熱休克處理后玻璃化冷凍組的卵母細(xì)胞細(xì)胞骨架正常率較玻璃化冷凍組有所下降，無明顯差異（P＞0.05），而姜黃素處理后玻璃化冷凍組的卵母細(xì)胞細(xì)胞骨架正常率明顯低于玻璃化冷凍組及熱休克處理后玻璃化冷凍組，有顯著差異（P＜0.05）。
　　結(jié)論:熱應(yīng)激處理玻璃化冷凍前小鼠MⅡ期卵母細(xì)胞并不能提高小鼠