呼吸道病毒高通量PCR-MassARRAY檢測方法的建立.pdf

1、呼吸道感染是世界范圍的常見病、多發(fā)病，主要是由各種呼吸道病毒以及一些細(xì)菌、支原體、衣原體和立克次體等引起，病毒中常見的是流感病毒(甲、乙、丙各型)、鼻病毒、腺病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒等。其臨床表現(xiàn)相似，如流涕，全身發(fā)熱等。
　　本試驗(yàn)擬建立快速、可同時檢測多種呼吸道病毒的PCR-MassARRAY技術(shù)，探討質(zhì)譜技術(shù)在呼吸道病毒臨床檢測中的應(yīng)用價值，為呼吸道病毒感染提供一種特異、高通量的診斷方法。具體步驟是首先根據(jù)GenBan

2、k錄入的17種呼吸道病毒全基因組序列，應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)設(shè)計 PCR擴(kuò)增引物和延伸引物，通過優(yōu)化各種反應(yīng)條件，建立檢測呼吸道病毒的PCR-MassARRAY技術(shù)。通過檢測同一癥侯群的不同病毒，確定本方法的特異性；通過定量檢測陽性質(zhì)粒，確定本方法的靈敏度。
　　在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用臨床標(biāo)本進(jìn)一步驗(yàn)證所建立的呼吸道病毒PCR-MassARRAY技術(shù)的實(shí)際檢測效果。標(biāo)本來源于2009年10月17日-2010年11月27日期間收集的110份疑

3、似甲型流感病毒感染的鼻咽拭子標(biāo)本(NPS)針對每份標(biāo)本同時采用WHO推薦的實(shí)時熒光定量PCR方法進(jìn)行檢測，并對PCR擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行序列測定分析。結(jié)果顯示針對甲型流感病毒，PCR-MassARRAY技術(shù)與WHO推薦的實(shí)時熒光定量 PCR技術(shù)的一致率達(dá)到94.54％(P>0.05)，靈敏度與特異性分別是96.43%和92.59%。除檢出甲型流感病毒以外，利用PCR-MassARRAY技術(shù)還從這批樣本中檢測出多重感染13例，共檢測出7種病原體。