呼吸道病毒高通量PCR-MassARRAY檢測方法的建立.pdf

1、呼吸道感染是世界范圍的常見病、多發(fā)病，主要是由各種呼吸道病毒以及一些細菌、支原體、衣原體和立克次體等引起，病毒中常見的是流感病毒(甲、乙、丙各型)、鼻病毒、腺病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒等。其臨床表現(xiàn)相似，如流涕，全身發(fā)熱等。
　　本試驗擬建立快速、可同時檢測多種呼吸道病毒的PCR-MassARRAY技術，探討質(zhì)譜技術在呼吸道病毒臨床檢測中的應用價值，為呼吸道病毒感染提供一種特異、高通量的診斷方法。具體步驟是首先根據(jù)GenBan

2、k錄入的17種呼吸道病毒全基因組序列，應用生物信息學技術設計 PCR擴增引物和延伸引物，通過優(yōu)化各種反應條件，建立檢測呼吸道病毒的PCR-MassARRAY技術。通過檢測同一癥侯群的不同病毒，確定本方法的特異性；通過定量檢測陽性質(zhì)粒，確定本方法的靈敏度。
　　在此基礎上，應用臨床標本進一步驗證所建立的呼吸道病毒PCR-MassARRAY技術的實際檢測效果。標本來源于2009年10月17日-2010年11月27日期間收集的110份疑

3、似甲型流感病毒感染的鼻咽拭子標本(NPS)針對每份標本同時采用WHO推薦的實時熒光定量PCR方法進行檢測，并對PCR擴增結果進行序列測定分析。結果顯示針對甲型流感病毒，PCR-MassARRAY技術與WHO推薦的實時熒光定量 PCR技術的一致率達到94.54％(P>0.05)，靈敏度與特異性分別是96.43%和92.59%。除檢出甲型流感病毒以外，利用PCR-MassARRAY技術還從這批樣本中檢測出多重感染13例，共檢測出7種病原體。