一種基于懸液芯片的呼吸道病毒多重檢測(cè)方法.pdf

1、呼吸道病毒是常見(jiàn)的引發(fā)急性呼吸道疾病的病原體，當(dāng)大規(guī)模流行性疾病暴發(fā)或急性呼吸道疾病需要盡快進(jìn)行臨床診斷時(shí)，快速鑒定病原體對(duì)疾病控制和治療是至關(guān)重要的。本文旨在建立一種基于懸液芯片技術(shù)的多種呼吸道病毒并行快速檢測(cè)方法，以BioPlex-200懸液芯片技術(shù)檢測(cè)平臺(tái)為基礎(chǔ)，依據(jù)NCBI公開(kāi)數(shù)據(jù)庫(kù)中呼吸道病毒的基因組序列，設(shè)計(jì)各種針對(duì)呼吸道病毒的特異性引物組和核酸探針，用多重不對(duì)稱PCR方法結(jié)合懸液芯片檢測(cè)的方式，可在5-6個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)

2、10種呼吸道病毒或亞型的快速檢測(cè)，從而達(dá)到節(jié)省時(shí)間、節(jié)約成本和降低勞動(dòng)量的目的。
　　依據(jù)NCBI公開(kāi)數(shù)據(jù)庫(kù)上各病毒的基因序列信息，選定病毒基因組中的保守區(qū)域?yàn)闄z測(cè)靶點(diǎn)，針對(duì)10種呼吸道病毒或亞型，包括腺病毒(AdV)，偏肺病毒(hMPV)，流感病毒A型(IfA)，流感病毒B型(IfB)，呼吸道合胞病毒(RSV)，副流感病毒1型(PIV1)，副流感病毒2型(PIV2)，副流感病毒3型(PIV3)，SARS病毒(SARS)，人類皰疹

3、病毒1型(HSV1)，設(shè)計(jì)并合成相應(yīng)引物組和探針序列，病毒核酸直接經(jīng)PCR或反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)PCR對(duì)目的序列進(jìn)行擴(kuò)增，產(chǎn)物與核酸探針微球組雜交，于BioPlex-200懸液芯片系統(tǒng)檢測(cè)熒光信號(hào)值。經(jīng)過(guò)檢測(cè)方法的優(yōu)化，各病毒的檢測(cè)靈敏度分別能達(dá)到:IfA約30 DNA拷貝;AdV、IfB、PIV2、PIV3、RSV、HSV1與SARS約3 DNA拷貝;hMPV和PIV1約1 DNA拷貝。對(duì)29個(gè)經(jīng)傳統(tǒng)方法鑒定為呼吸道病毒的臨床樣本，在懸液芯片檢