糖尿病大鼠皮膚改變對(duì)酮康唑經(jīng)皮吸收的影響.pdf

1、背景和目的：
　　糖尿病(diabetes mellitus，DM)是由多種病因引起的以慢性高血糖為特征的代謝紊亂，是由遺傳原因和環(huán)境因素作用而累及全身，需要長(zhǎng)期治療、困擾全球的慢性代謝性疾病，久病可引起患者多系統(tǒng)損害。糖尿病是WHO確定的4大主要非傳染性疾病之一，全球每8秒鐘就有1人死于糖尿病，每年死于糖尿病者約400萬(wàn)，據(jù)WHO數(shù)據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，全球已有糖尿病患者1.8億左右，預(yù)測(cè)到2025年全世界糖尿病患病人數(shù)將達(dá)3.33億，2

2、011中國(guó)最新糖尿病流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果表明:在年齡≥20歲的中國(guó)人群中，糖尿病和糖尿病前期患病率分別高達(dá)9.7％和15.5％，以此推算目前中國(guó)有9240萬(wàn)成年人患有糖尿病，有1.482億人處于糖尿病前期。我國(guó)糖尿病患病率快速上升的現(xiàn)實(shí)的確令人堪憂(yōu)。糖尿病患者的免疫力低下，病人的血糖升高，皮膚組織的糖原含量也增高，這樣就給霉菌、細(xì)菌的感染創(chuàng)造了良好的環(huán)境，很容易并發(fā)各種真菌、細(xì)菌和病毒感染，在糖尿病的各個(gè)時(shí)期，可出現(xiàn)多種皮膚病變，糖尿病患者

3、罹患皮膚病的比例約占25％～30％。
　　酮康唑(Ketoconazole)為化學(xué)合成吡咯類(lèi)(azoles)抗真菌藥，具廣譜抗真菌作用，對(duì)念珠菌、著色真菌、球袍子菌、隱球菌、組織胞漿菌、皮炎芽生菌、孢子絲菌等均具抗菌活性。對(duì)全身真菌感染，深部真菌感染，表皮真菌感染均有效。酮康唑口服可引起多種毒副作用，如肝毒性、胃腸道反應(yīng)等。所以目前的主要使用形式為外用制劑，包括酮康唑凝膠劑、乳膏劑、軟膏劑、混懸液洗劑等。
　　微透析(Mic

4、rodialysis)技術(shù)是一種先進(jìn)的在體取樣技術(shù)，其最大優(yōu)點(diǎn)是可在基本不干擾體內(nèi)正常生命過(guò)程的情況下進(jìn)行在體，實(shí)時(shí)和在線(xiàn)取樣，該技術(shù)用來(lái)監(jiān)測(cè)生物體局部藥物濃度有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。
　　對(duì)于糖尿病皮膚外用酮康唑經(jīng)皮給藥制劑與正常皮膚的差異性，目前尚無(wú)科學(xué)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)。因此，開(kāi)展糖尿病患者經(jīng)皮吸收的研究，對(duì)指導(dǎo)糖尿病患者合理地使用抗真菌藥物，具有非常大的社會(huì)意義。并期望在研究結(jié)果的指導(dǎo)下提高用藥安全，提高患者的生命質(zhì)量，最終為社會(huì)帶來(lái)經(jīng)濟(jì)

5、效益。
　　本研究利用微透析技術(shù)及體外擴(kuò)散池(Franz)技術(shù)對(duì)臨床常用的抗真菌藥物酮康唑進(jìn)行研究，將其制成凝膠劑、乳膏劑和軟膏劑，比較其經(jīng)糖尿病和正常大鼠皮膚的滲透吸收差異，并分析皮下組織藥物濃度/血藥濃度-時(shí)間曲線(xiàn)圖，計(jì)算各種動(dòng)力學(xué)參數(shù)。希望研究結(jié)果能為臨床藥師開(kāi)展針對(duì)糖尿病病人合理外用酮康唑制劑咨詢(xún)提供依據(jù)，為指導(dǎo)臨床醫(yī)師、護(hù)士防治及護(hù)理糖尿病患者時(shí)適宜地外用酮康唑制劑提供一定的實(shí)驗(yàn)參考依據(jù)。
　　內(nèi)容和結(jié)果：

6、　　為研究糖尿病皮膚的改變對(duì)藥物經(jīng)皮吸的影響，需要建立一種糖尿病動(dòng)物模型，本課題采用操作簡(jiǎn)單且成功率較高的鏈脲菌素(STZ)腹腔注射法誘導(dǎo)建立大鼠糖尿病模型，分別采用大劑量單詞注射和小劑量多次注射并配合高糖高脂飲食誘導(dǎo)，建立一型和二型糖尿病模型。造模給藥后，發(fā)現(xiàn)造模組大鼠較正常組體重有明顯下降，而血糖發(fā)生了顯著升高(＞16.7mmol)，且能在較高水平能維持很長(zhǎng)時(shí)間，說(shuō)明造模方法成功可行。
　　體外Franz擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)中，將80只W

7、istar雄性大鼠隨機(jī)分成正常組及糖尿病模型組，每組40只，對(duì)造模組大鼠進(jìn)行糖尿病造模。取大鼠腹部皮膚進(jìn)行體外透皮擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)，考察酮康唑凝膠劑、乳膏劑、軟膏劑經(jīng)兩組大鼠皮膚的差異性，每種劑型、每組各做六只大鼠。接收液均采用含10％乙醇的磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.4)，HPLC法測(cè)定接收液中的藥物量，并計(jì)算出藥物滲透速率。HPLC檢測(cè)采用C18柱，流動(dòng)相甲醇-pH6.8磷酸鹽緩沖液=70∶30，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)235nm，流速1.0mL·m

8、in-1，進(jìn)樣量20μL。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酮康唑凝膠劑經(jīng)正常組、糖尿病模型組的滲透速率分別為3.38±0.36和4.56±0.67(μg·h-1·cm-2)，糖尿病模型組與正常組之間存在顯著差異(P＜0.05，n=6);酮康唑乳膏劑經(jīng)正常組、糖尿病模型組的滲透速率分別為1.33±0.41和1.87±0.11(μg·h-1·cm-2)，糖尿病模型組與正常組之間存在顯著差異（P＜0.05，n=6）;酮康唑軟膏劑經(jīng)正常組、糖尿病模型組的滲透速率分別

9、為0.77±0.42和1.72±0.86(μg·h-1·cm-2)，糖尿病模型組與正常組之間存在顯著差異(P＜0.05，n=6)。由這些數(shù)據(jù)可知，與正常皮膚相比，患糖尿病后的皮膚能引起藥物經(jīng)皮透過(guò)性的增加，三種劑型得出一致結(jié)論，說(shuō)明這種差異性與劑型關(guān)系不大，而與糖尿病后發(fā)生一定程度的皮膚組織學(xué)改變存在密切關(guān)系。
　　在體微透析實(shí)驗(yàn)中，分別在大鼠的頸靜脈和腹部皮下植入微透析探針，灌流液采用Ringer液，流速為1μL·min-1，每

10、45min收集一份樣品，樣品采用LC-MS/MS方法進(jìn)行檢測(cè)。C18色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1％甲酸水(70∶30)，流速0.3ml·min-1;進(jìn)樣量10μl。質(zhì)譜條件采用電噴霧二級(jí)質(zhì)譜，ESI源，使用全掃描一級(jí)質(zhì)譜和選擇離子正離子檢測(cè)，多級(jí)反應(yīng)檢測(cè)模式(MRM)。脫溶劑溫度350℃，脫溶劑氣流速11L·min-1、裂解電壓205eV、碰撞能量25eV、酮康唑的掃描離子片段分別為531.2→82.1。
　　在體微透析結(jié)果顯示，

11、三種劑型得出一致結(jié)果，即糖尿病大鼠腹部皮下Cmax及AUCall同正常組大鼠組相比具有顯著性差異(P＜0.05，n=6)，Tmax沒(méi)有顯著差異(P＞0.05，n=6)，這說(shuō)明糖尿病皮膚的改變真實(shí)地增加了藥物的局部滲透吸收。但頸靜脈Cmax、AUCal及Tmax兩組間并不存在顯著性差異(P＞0.05，n=6)，由于微透析法只能夠測(cè)定血漿中游離藥物濃度，說(shuō)明正常組和造模組大鼠血液中游離藥物濃度的差異并不是很大，但不能排除進(jìn)入血液的大部分藥物

12、發(fā)生了代謝或與血漿蛋白的結(jié)合，以及藥物進(jìn)入體內(nèi)后轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝的復(fù)雜過(guò)程減弱了經(jīng)皮透過(guò)量對(duì)血藥濃度的影響。
　　結(jié)論與討論：
　　本研究中建立了成熟的糖尿病大鼠建立方法，及酮康唑的HPLC及LC-MS/MS檢測(cè)方法，并完善了微透析的實(shí)驗(yàn)方法。采用體外Franz擴(kuò)散池技術(shù)及體內(nèi)微透析的方法對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證，綜合體內(nèi)外結(jié)果說(shuō)明，糖尿病的發(fā)生確實(shí)會(huì)引起皮膚發(fā)生一定的病理改變，從而造成了酮康唑透過(guò)的增加，因此，提示糖尿病患者在使用KTZ等

13、外用抗真菌藥物給藥時(shí)，可能需要要酌情考慮藥物的使用劑量，從而減少藥物的毒副作用，提高患者的生活質(zhì)量。
　　在課題研究中，由于時(shí)間、精力等原因，還有很多不足之處。例如，只考察了酮康唑這一種藥物，藥物經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收過(guò)程復(fù)雜，與分子結(jié)構(gòu)，藥物代謝機(jī)制密切相關(guān)，所以?xún)H憑一種藥物的研究結(jié)果并不能代表所有抗真菌藥物，后續(xù)在時(shí)間和精力允許的情況下，考慮以現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)方法為基礎(chǔ)，進(jìn)一步補(bǔ)充模型藥物，做深入研究。在體微透析實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物個(gè)體差異很大，頸靜脈