SP17、SPAG9、OY-TES-1基因在卵巢上皮性癌中的實(shí)時(shí)定量PCR表達(dá)及甲基化情況的研究.pdf

1、目的：檢測(cè)SP17、SPAG9、OY-TES-1這三種癌-睪丸抗原基因在卵巢上皮性癌與非卵巢癌中的qRealtime-PCR擴(kuò)增基因表達(dá)及這三種基因在啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化情況，探討其與卵巢上皮性癌的關(guān)系。
　　方法：收集2015年1月至2016年4月于內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院行卵巢手術(shù)患者的新鮮卵巢組織共60例，其中有30例新鮮的卵巢上皮性癌組織標(biāo)本，及30例新鮮的非卵巢癌組織標(biāo)本。qRealtime-PCR實(shí)驗(yàn)：從卵巢組織中提取RNA

2、，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，運(yùn)用SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)上皮性卵巢癌及非卵巢癌中的特定RNA序列進(jìn)行定量分析。甲基化實(shí)驗(yàn)：提取卵巢組織的DNA，運(yùn)用DNA酸性亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化、PCR擴(kuò)增及PCR測(cè)序方法檢測(cè)SP17、SPAG9、OY-TES-1在卵巢上皮性癌與非卵巢癌中CpG島的甲基化差異性表達(dá)情況。qRealtime-PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用2－△△CT進(jìn)行處理后，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析，P＜0.0

3、01有顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。檢測(cè)甲基化情況所得數(shù)據(jù)用SPSS19.0進(jìn)行卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴60例實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中，最終上皮性卵巢癌及非卵巢癌組織標(biāo)本中各有25例結(jié)果在有效分析范圍內(nèi)；⑵SP17基因的RNA在卵巢上皮性癌中的表達(dá)高于其在非卵巢癌中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.913，P＜0.001)；SPAG9基因的RNA在卵巢上皮性癌中的表達(dá)高于其在非卵巢癌中的

4、表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.312，P＜0.001)；OY-TES-1基因的RNA在卵巢上皮性癌中的表達(dá)高于其在非卵巢癌中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.976，P＜0.001)；⑶在25例上皮性卵巢癌中SP17、SPAG9、OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)去甲基化發(fā)生率分別為：56％（14/25）、52%（13/25）、44%（11/25）；在25例非卵巢癌中SP17、SPAG9、OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)去甲基化發(fā)生率分別為

5、：12%（3/25）、16%（4/25）、8%（2/25）；這三種基因的去甲基化表達(dá)情況在上皮性卵巢癌與非卵巢癌中相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；⑷SP17、SPAG9、OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)去甲基化表達(dá)與上皮性卵巢癌患者的年齡、組織類型及分化程度無(wú)關(guān)（P＞0.05）；SP17、SPAG9、OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)去甲基化表達(dá)與上皮性卵巢癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）；SP17、SPAG9基因啟動(dòng)子區(qū)域去甲基化表

6、達(dá)與上皮性卵巢癌患者的臨床分期有關(guān)（P＜0.05），而OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)域去甲基化表達(dá)與其臨床分期無(wú)關(guān)（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①SP17、SPAG9、OY-TES-1基因的RNA在卵巢上皮性癌中的表達(dá)高于其在非卵巢癌中的表達(dá)，聯(lián)合檢測(cè)SP17、SPAG9、OY-TES-1基因在上皮性卵巢癌患者中的RNA表達(dá)水平，可以提高上皮性卵巢癌診斷地靈敏性，有望成為診斷上皮性卵巢癌有效生物學(xué)標(biāo)志物。②在上皮性卵巢癌患者中SP1

7、7、SPAG9、OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)去甲基化表達(dá)率高于其在非卵巢癌患者中的表達(dá)；SP17、SPAG9、OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)在上皮性卵巢癌中激活，可能參與癌癥的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸；③③SP17、SPAG9、OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)去甲基化表達(dá)與上皮性卵巢癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；SP17、SPAG9基因啟動(dòng)子區(qū)域去甲基化表達(dá)與臨床分期有關(guān)，而OY-TES-1基因啟動(dòng)子區(qū)域去甲基化表達(dá)與臨床分期無(wú)關(guān)；但這三種癌睪丸抗原均與上