HIC-1基因在宮頸癌Hela細胞中的表達及其甲基化調控.pdf

1、目的：檢測甲基化抑制劑處理前后宮頸癌Hela細胞增殖、凋亡改變，及HIC-1、HPV表達的變化，初步探討去甲基化對宮頸癌中HIC-1基因及HPV表達的影響。 方法：分別用不同濃度5-氮雜脫氧胞苷(5-Aza-CdR)干預細胞5d。提取細胞的RNA，采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測HIC-1mRNA、P53mRNA、HPV18E6mRNA在干預后表達變化情況；用直接記數(shù)法和四甲基偶氮唑鹽(MTT)顯色法檢測細胞生長曲

2、線與細胞增殖實驗。 結果： (1)凝膠圖像分析儀分析RT-PCR產(chǎn)物：實驗組5-Aza-CdR(終濃度分別為5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)作用Hela細胞5d前后，①各實驗組和對照組HIC-1 mRNA/β-actin分別為0.486±0.025、O.548±0.014、0.864±0.032、0.927±0.031，隨著5-Aza-CdR濃度的升高，其表達隨之增加，經(jīng)方差分析對照組和實驗組之間差異

3、具有顯著性(F=701.430，P<0.05)。②實驗組和對照組P53 mRNA/β-actin分別為0.063±0.026、0.207±0.028、0.598±0.030、0.807±0.029。經(jīng)方差分析多重比較結果顯示試驗組與對照組有顯著性差異(F=446.673，P<0.05)。③實驗組和對照組HPV18E6mRNA/β-actin分別為0.405±0.022、0.373±0.021、0.377±0.015、0.408±0.01

4、2，各實驗組和對照組數(shù)據(jù)之間差異無顯著性(F=2.900，P>0.05)，即5-Aza-CdR干預前后，HPV18E6mRNA表達無明顯改變。 (2)經(jīng)終濃度分別為5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的5-Aza-CdR處理HeLa細胞5d后，MTT檢測各實驗組細胞活力分別為(A490值)65.08％±4.06％、49.68％±1.49％、38.80％±3.00％，與對照組(A490值)91.22％±2.7％，比較

5、有明顯差異(F=208.39 P<0.05)。在所檢測的濃度范圍內隨著5-Aza-CdR濃度的增加，對HeLa細胞作用隨之增加，呈量-效關系(相關度比較R=-0.969：P<0.05)。 (3)5-Aza-CdR處理前后Hela細胞形態(tài)學出現(xiàn)以下改變：倒置顯微鏡下觀察，對照組細胞生長良好，細胞伸展、透亮，呈不規(guī)則對角型，隨時間推移，細胞逐漸增多，細胞接觸緊密。實驗組20μmol/L的5-Aza-CdR作用5d后Hela細胞細胞密