Survivin-siRNA誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)凋亡研究.pdf

1、目的：將針對(duì)survivin基因的兩段RNA干擾序列(pGenesil-8-siRNA-survivin2，pGenesil-8-siRNA-survivin10)分別轉(zhuǎn)染及共轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，研究其沉默survivin基因的表達(dá)及其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的效應(yīng)。 方法：以survivin基因?yàn)榘悬c(diǎn)，應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將構(gòu)建的兩段RNA干擾序列分別轉(zhuǎn)染及共轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，通過激光共聚焦顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率；采用r

2、eal-time PCR方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)survivin基因mRNA水平的表達(dá)變化；利用Western-blotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)survivin蛋白表達(dá)變化；應(yīng)用Annexin-V-cy5/7AAD雙染后流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖效應(yīng)。 結(jié)果：體外細(xì)胞模型研究結(jié)果表明：①轉(zhuǎn)染pGenesil-8-siRNA-survivin2組，pGenesil-8-siRNA-survivin10組及共轉(zhuǎn)染組(p

3、Genesil-8-siR-NA-survivin2/survivin10)與對(duì)照組相比，survivin基因的mRNA表達(dá)水平顯著降低，其中Pg-8-EGFP-survivin2/survivin10組survivin基因的mRNA表達(dá)水平較其他組降低最多，pGenesil-8-siRNA-survivin2組與pGenesil-8-siRNA-survivin10組之間無顯著差異；②轉(zhuǎn)染pGenesil-8-siRNA-surviv

4、in2組或pGenesil-8-siRNA-survivin10組以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組survivin基因的蛋白表達(dá)水平顯著降低，其中pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組survivin基因的蛋白表達(dá)水平較其他組降低最多，pGenesil-8-siRNA-survivin2組與pGenesil-8-siRNA-survivin10組比較無

5、顯著差異；③轉(zhuǎn)染pGenesil-8-siRNA-survivin2組或pGenesil-8-siRNA-sur-vivin10組以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組人腫瘤細(xì)胞凋亡率顯著增加，其中Pg-8-EGFP-survivin2/survivin10組人腫瘤細(xì)胞凋亡率增加最多，pGenesil-8-survivin2組與pGenesil-8-survivin10組比較無顯著差異；④pGe

6、nesil-8-siRNA-sur-vivin2組或pGenesil-8-siRNA-survivin10組以及pGenesil-8-siRNA-survivin2/sur-vivin10組可抑制人腫瘤細(xì)胞增殖，其中pGenesil-8-siRNA-survivin2/survivin10組的抑制作用最強(qiáng)。 結(jié)論：針對(duì)survivin基因的兩段RNA干擾序列能夠沉默MCF-7 survivin基因的表達(dá)，增加腫瘤細(xì)胞的凋亡同時(shí)抑