兩種體外方法評(píng)價(jià)不同根管封閉劑對(duì)臨床分離糞腸球菌抗菌效果的研究.pdf

1、根管治療的目的在于徹底清除感染物質(zhì)與壞死組織，促進(jìn)組織的修復(fù)與再生。然而以目前的根管預(yù)備和消毒方法，不能完全清除根管內(nèi)的微生物；加之根管解剖的變異和復(fù)雜性，感染根管的細(xì)菌常存在于牙本質(zhì)小管、根管側(cè)枝等較隱匿的區(qū)域。這些細(xì)菌繁殖后會(huì)造成根管內(nèi)的再感染，最終導(dǎo)致根管治療的失敗。因此，對(duì)于永久充填在根管內(nèi)的封閉劑來說，不僅需要有良好的封閉性能來封閉根管的冠方和根方，還需要具有抗菌活性來殺滅根管內(nèi)的殘余細(xì)菌，提高根管治療的成功率。
　　因

2、此，在根管充填中選用抗菌能力強(qiáng)的封閉劑，對(duì)于徹底預(yù)防再感染能起到關(guān)鍵的作用。隨著口腔材料學(xué)的發(fā)展，許多新型根管封閉劑不斷應(yīng)用于臨床，如GuttaFlow、iRoot SP封閉劑等，其良好的生物相容性、嚴(yán)密的封閉性和便捷的操作性，使其在臨床治療中的應(yīng)用日益廣泛，但是其抗菌性能如何？和傳統(tǒng)的封閉劑相比，其抗菌性能有何優(yōu)勢？值得我們分析研究。目前，研究封閉劑抗菌性的方法較多，如ADT、DCT、感染根管模型等，其具有各自優(yōu)缺點(diǎn)，不同方法得出的抗

3、菌效果是否一致？這也值得我們對(duì)比研究。
　　本課題通過選用DCT和感染根管模型兩種體外檢測方法，對(duì)氧化鋅丁香油（zinc oxide-euqenol，ZOE）、AH-Plus、GuttaFlow、iRoot SP和Vitapex五種臨床常用的根管封閉劑的抗菌效果進(jìn)行研究分析，觀察其對(duì)臨床分離糞腸球菌（Enterococcus faecalis，E.f）的抗菌效果，并測定其流動(dòng)性和pH值，以期為臨床治療的選擇提供依據(jù)，也為設(shè)計(jì)更加完

4、善的評(píng)價(jià)封閉劑抗菌性能的實(shí)驗(yàn)提供思路。實(shí)驗(yàn)分為以下四個(gè)部分：
　　一、臨床E.f的采集、分離和鑒定
　　選取就診于我科室的病例20例，均需要根管再治療。采用糞鏈球菌培養(yǎng)基（Streptococcus Faecalis Medium，SF Medium）和膽汁七葉苷培養(yǎng)基對(duì)臨床分離的菌株進(jìn)行培養(yǎng)，通過觀察顏色變化進(jìn)行初步鑒定；鑒定為陽性結(jié)果的菌株利用 BBL CRYSTAL系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌生化反應(yīng)的鑒定；最后利用聚合酶鏈反應(yīng)（po

5、lymerase chain reaction，PCR）和DNA純化回收技術(shù)，鑒定細(xì)菌的16SrRNA序列，并與基因庫中的標(biāo)準(zhǔn)菌進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果顯示，在收集的20例病例樣本中，有6例分離鑒定出E.f，檢出率為30％。本實(shí)驗(yàn)說明16SrRNA和PCR擴(kuò)增技術(shù)是目前臨床中檢測鑒定E.f的重要方法，其精確度明顯大于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)法，確保了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。
　　二、利用DCT評(píng)價(jià)不同根管封閉劑的抗菌效果
　　將ZOE、AH-Plus、

6、GuttaFlow、iRoot SP和Vitapex五種封閉劑均勻混合后放入離心管底部，陽性對(duì)照組選用凡士林。在新鮮混合（20min）和1d、3d、7d、14d時(shí)分別取出相應(yīng)樣本，與提前配制的 E.f菌懸液充分接觸1h，陰性對(duì)照組加入無菌去離子水。隨后吸取菌液梯度稀釋，厭氧培養(yǎng)并鋪板計(jì)數(shù)，記錄24h內(nèi)五種封閉劑抗菌效果的變化。結(jié)果顯示：生物陶瓷類封閉劑 iRoot SP和AH-Plus在新鮮混合時(shí)（20min）可以完全殺滅細(xì)菌，且iRo

7、ot SP的抗菌能力可以維持7d（P<0.05）；ZOE、AH-Plus和Vitapex封閉劑在新鮮混合時(shí)（20min）具有較強(qiáng)的抗菌性（P<0.05），但3d后抗菌性基本消失（P>0.05）；而GuttaFlow封閉劑則對(duì)臨床分離的E.f沒有抗菌效果（P>0.05）。
　　三、利用E.f感染根管模型評(píng)價(jià)不同根管封閉劑的抗菌效果
　　收集單直根管人牙成功建立 E.f感染根管模型，隨機(jī)分為五個(gè)實(shí)驗(yàn)組（ZOE、AH-Plus、G

8、uttaFlow、iRoot SP和Vitapex）進(jìn)行根管充填，并同時(shí)設(shè)置陽性、陰性對(duì)照組。分別在1d、3d、7d和14d時(shí)取出相應(yīng)樣本，利用球鉆磨除充填材料和牙本質(zhì)。收集粉末并進(jìn)行梯度稀釋，培養(yǎng)后細(xì)菌計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示：GuttaFlow封閉劑仍然對(duì)臨床分離的E.f沒有抗菌效果（P>0.05），而其余封閉劑的抗菌性均可以維持到14d（P<0.05），其抗菌時(shí)間較DCT實(shí)驗(yàn)中有所延長；ZOE、AH-Plus和Vitapex三種封閉劑的抗菌

9、性在3d后基本上無變化（P>0.05），而 iRoot SP在14d時(shí)抗菌性最強(qiáng)（P<0.05），說明隨著時(shí)間的延長，其抗菌性并沒有減弱。據(jù)此得出初步結(jié)論：在評(píng)價(jià)封閉劑抗菌能力時(shí)，應(yīng)根據(jù)各封閉劑的組成成分、物理化學(xué)特性，選擇合適的方法進(jìn)行測定。
　　四、體外不同根管封閉劑流動(dòng)性和pH值的測定
　　五種封閉劑各自混合后放置在玻璃板中心位置，并將另一塊玻璃板輕壓于封閉劑表面，在其上放置120g砝碼。10分鐘后，取下覆蓋于封閉劑上

10、的玻璃板和砝碼，用游標(biāo)卡尺測量各封閉劑形成圓形圖案的最大與最小直徑，取其平均值。pH測定方法為：各封閉劑均勻涂抹在24孔板的孔底部，分別在混合后20min和1d、3d、7d、14d取出，將3ml去離子水加入到每個(gè)孔中，利用pH測試儀進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示：流動(dòng)性由強(qiáng)到弱排序?yàn)閕Root SP>GuttaFlow>ZOE>AH-Plus>Vitapex；14d時(shí)pH由高到低的排列順序?yàn)閕Root SP>VItapex>AH-Plus>Gutt