重組人p53腺病毒聯(lián)合順鉑對(duì)人卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1-DDP的敏感性分析及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的：
　　目前，對(duì)化療藥物耐藥仍然是卵巢癌治療失敗的主要原因。在順鉑聯(lián)合紫杉醇的基礎(chǔ)方案上添加新的二線化療藥物，耐藥或復(fù)發(fā)患者的響應(yīng)率只有不到30％。另外，隨之增加的藥物毒性反應(yīng)及不良反應(yīng)致使患者的耐受性和依從性均降低。由此，針對(duì)耐藥基因的靶向治療就凸顯優(yōu)勢(shì)。由于近80％的卵巢癌患者存在p53基因的突變，所以大部分的基因治療都聚焦于腫瘤抑癌基因p53。但是使用基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)將野生型p53再次導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞后，攜帶野生型p53的

2、腫瘤細(xì)胞和突變型p53的腫瘤細(xì)胞哪個(gè)凋亡更明顯，國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)果似乎并不一致，也有研究報(bào)道p53的基因治療與細(xì)胞內(nèi)p53的狀態(tài)無(wú)關(guān)。近期有研究認(rèn)為關(guān)于耐藥的基因診斷有可能預(yù)測(cè)預(yù)后，但單獨(dú)的分子靶向治療或許不足以改善晚期卵巢癌患者的預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)在不考慮p53狀態(tài)的情況下，利用重組人p53腺病毒(rAd-p53)聯(lián)合順鉑作用于人卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞系COC1/DDP，觀察其對(duì)耐藥細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
　　p73是p53家族成員之一，2個(gè)不同

3、的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄生成促凋亡的TAp73和抗凋亡的ΔTAp73亞型，不同亞型在細(xì)胞中的表達(dá)比決定了細(xì)胞生死命運(yùn)?，F(xiàn)已證實(shí)顯性負(fù)性的ΔNp73亞型與腫瘤的化療耐藥密切相關(guān)，并能通過(guò)反饋回路抑制野生型p53和TAp73的促凋亡作用。本研究從基因水平使用熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)了rAd-p53、順鉑及聯(lián)合用藥作用下p73的所有N端亞型表達(dá)情況，探討各亞型在耐藥人卵巢癌細(xì)胞凋亡中的作用。
　　方法：
　　將人卵巢癌鉑類(lèi)耐藥細(xì)胞COC1/DD

4、P分成4組培養(yǎng):對(duì)照組（不加藥）;rAd-P53組(MOI400);順鉑組(12ug/ml);聯(lián)合用藥組(順鉑12ug/ml+rAd-p53400MOI)。MTT法測(cè)定不同濃度梯度下順鉑及rAd-p53對(duì)COC1/DDP細(xì)胞的A570值，比較不同處理組的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率。使用熒光定量PCR技術(shù)半定量檢測(cè)不同處理組p73所有N端亞型mRNA的相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　(1)順鉑組、rAd-p5

5、3組、聯(lián)合用藥組24小時(shí)細(xì)胞抑制率分別是46.21±6.31％、13.48±2.49％、64.80±6.15％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=217.328，P=0.000)，兩兩比較結(jié)果顯示各組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(2)聯(lián)合用藥組、順鉑組、rAd-p53組及對(duì)照組12小時(shí)細(xì)胞凋亡率分別為19.55±1.13％、14.96±1.80％、7.71±1.46％、6.23±0.98％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=61.688

6、，P=0.000)。兩兩比較結(jié)果:聯(lián)合用藥組與單藥組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而rAd-p53組與未加藥組之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　(3)熒光定量PCR結(jié)果:不同處理組中野生型p53的mRNA相對(duì)表達(dá)量均升高，但只有順鉑組和rAd-p53組與對(duì)照組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　順鉑處理組中TAp73和Ex2/3p73的相對(duì)表達(dá)量升高(P＜0.05)，而ΔNp73的表達(dá)下調(diào)(P＜

7、0.05)。ΔN'p73和Ex2p73的表達(dá)上調(diào)，與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　rAd-p53組中5種亞型的相對(duì)表達(dá)量均升高。除了Ex2p73，其余4種亞型與未加藥組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　聯(lián)合用藥組中ΔN'p73的相對(duì)表達(dá)量較對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其余4種亞型的相對(duì)表達(dá)量與未加藥組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)