多因素聯(lián)合基因治療對(duì)H22實(shí)體瘤生長(zhǎng)抑制作用的初步探討.pdf

1、目的:本文擬采用pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1和pcDNA3.1-CH510治療質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠H22細(xì)胞,探討不同濃度,不同組合的治療方案對(duì)H22實(shí)體瘤生長(zhǎng)的抑制作用,尋求治療H22實(shí)體瘤的最佳治療方案。
　　方法:(1)以H22肝癌細(xì)胞接種于BALB/c小鼠右后腿肌肉內(nèi),建立實(shí)驗(yàn)性小鼠腫瘤模型。(2)采用裸質(zhì)粒DNA原位注射法讓質(zhì)粒pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA

2、3.1-TNF-α、pcDNA3.1-CXCL-1和pcDNA3.1-CH510在腫瘤原位表達(dá)相應(yīng)的產(chǎn)物IFN-β、TNF-α、CXCL-1、CH50。(3)采用裸質(zhì)粒DNA尾靜脈注射法實(shí)現(xiàn)荷瘤鼠肝內(nèi)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1-IFN-β進(jìn)行基因治療。(4)通過(guò)比較腫瘤瘤重觀察不同組別治療方案的效果。(5)評(píng)估出各種基因的最適濃度后,將各種基因進(jìn)行聯(lián)合治療荷瘤小鼠,觀察聯(lián)合治療方案中腫瘤生長(zhǎng)抑制率與單獨(dú)每個(gè)基因的腫瘤生長(zhǎng)抑制率,評(píng)價(jià)聯(lián)合治

3、療的效果。
　　結(jié)果:(1)pcDNA3.1-IFN-β質(zhì)粒分別通過(guò)腫瘤接種原位肌肉注射和尾靜脈注射,濃度設(shè)置為50μg/100μl,100μg/100μl,200μg/100μl,結(jié)果顯示尾靜脈注射100μg/100μl為合適的治療方案,既對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用(40％左右),同時(shí)毒副作用較小。(2)pcDNA3.1-TNF-α質(zhì)粒通過(guò)腫瘤接種原位肌肉注射,濃度設(shè)置為10μg/100μl,30μg/100μl,50μg/1

4、00μl,100μg/100μl,結(jié)果顯示最適治療方案為腫瘤接種原位肌肉注射10μg,抑制腫瘤生長(zhǎng)率為70%。(3)pcDNA3.1-CXCL-1質(zhì)粒肌肉注射于腫瘤接種原位,濃度設(shè)置為5μg/100μl,10μg/100μl,30μg/100μl,50μg/100μl,100μg/100μl實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示10μg/100μl即可抑制腫瘤生長(zhǎng)40%左右。(4)將pcDNA3.1-IFN-β、pcDNA3.1-TNF-α、pcDNA3.1-C

5、XCL-1三種質(zhì)粒聯(lián)合對(duì)荷瘤鼠進(jìn)行治療,可以得到比單獨(dú)使用任何一種基因治療都強(qiáng)的抑制效果,腫瘤生長(zhǎng)抑制率能夠達(dá)到80%。(5)在以上三種質(zhì)粒聯(lián)合治療的基礎(chǔ)上,我們另加入50μg的pcDNA3.1-CH510質(zhì)粒注射到腫瘤接種部位,聯(lián)合運(yùn)用于H22腫瘤模型中進(jìn)行治療,可觀察到腫瘤生長(zhǎng)抑制在90%以上,甚至治療組內(nèi)部分小鼠腫瘤接種部位根本觸摸不到腫瘤的生長(zhǎng)。
　　結(jié)論:將多種具有抗癌效果的細(xì)胞因子的基因以小劑量,多種方式組合在一起對(duì)腫