刺參酸性粘多糖對(duì)H22荷瘤小鼠腫瘤生長抑制作用及相關(guān)基因與蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過觀察刺參酸性粘多糖（Stichopus japonicas acidic mucopolysaccharide，SJAMP）對(duì)肝癌H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用，從細(xì)胞分子生物學(xué)角度探討其對(duì)H22肝癌細(xì)胞的增殖與凋亡作用，研究H22肝癌細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)，為SJAMP的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:建立肝癌H22荷瘤小鼠模型，將50只昆明種小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，分別為陰性對(duì)照組（A

2、組，生理鹽水）、陽性對(duì)照組(B組，5-FU20mg/kg)、SJAMP低劑量組(C組，SJAMP6.25mg/kg)、 SJAMP中劑量組(D組，SJAMP12.5mg/kg)、SJAMP高劑量組（E組，SJAMP25mg/kg）。在建立肝癌模型的同時(shí)，各組均采用腹腔注射方式給藥，每日一次，連續(xù)給藥12天后處死。觀察小鼠腫瘤發(fā)生情況，分別應(yīng)用光學(xué)顯微鏡及電鏡觀察各實(shí)驗(yàn)組小鼠的瘤組織及細(xì)胞的病理學(xué)變化，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)H22腫瘤細(xì)胞

3、內(nèi)PCNA、P53、P21、C-myc、Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1、Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)，用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR，RT-PCR)方法檢測(cè)H22腫瘤細(xì)胞中P53、P21、C-myc、Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1、Bcl-2、Bax mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:荷瘤小鼠經(jīng)腹腔注射12天后，脫頸椎處死，無菌條件下剝?nèi)∧[瘤組織，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)各組均有腫瘤組織出現(xiàn)，同陰性對(duì)照

4、組相比，其它四組瘤量均有所減輕，且B、E兩組瘤量與A組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);HE染色顯示SJAMP各劑量組腫瘤細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞質(zhì)固縮，核質(zhì)比減小;透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SJAMP各劑量組腫瘤細(xì)胞均出現(xiàn)不同程度的凋亡形態(tài)學(xué)特征，如出現(xiàn)細(xì)胞固縮、細(xì)胞質(zhì)邊集、凋亡小體等;免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，與A組相比，SJAMP各劑量組小鼠與細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)蛋白PCNA、P53、C-myc、Cyclin D1、CDK4、E2F-1、Bcl

5、-2表達(dá)下降，且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，P21、pRb、Bax蛋白的表達(dá)上升，且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);Real-time PCR結(jié)果顯示，與A組相比，SJAMP各劑量組小鼠與細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)基因P53、C-myc、CyclinD1、CDK4、E2F-1、Bcl-2表達(dá)下降，且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，P21、pRb、Bax蛋白的表達(dá)上升，且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:SJAMP能夠抑

6、制肝癌H22荷瘤小鼠腫瘤的生長。SJAMP可能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞內(nèi)增殖細(xì)胞核蛋白PCNA、增殖相關(guān)基因p53、p21、C-myc mRNA及蛋白的表達(dá)，并通過調(diào)節(jié)Rb-E2F通路中Cyclin D1、CDK4、pRb、E2F-1 mRNA及蛋白的表達(dá)，作用于細(xì)胞周期，使小鼠H22肝癌細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞周期阻滯，抑制腫瘤細(xì)胞增殖;SJAMP也可能能通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)基因Bax、Bcl-2mRNA及蛋白的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，從而達(dá)到