hCdc14A在人垂體瘤中的表達及作用機制.pdf

1、研究背景：
　　垂體由解剖和功能兩部分組成:垂體前葉即腺垂體，垂體后葉即神經(jīng)垂體。腺垂體協(xié)調(diào)下丘腦以及外周內(nèi)分泌器官的信號，是調(diào)節(jié)外周內(nèi)分泌器官激素分泌的最重要樞紐。垂體瘤是神經(jīng)外科常見的腫瘤，目前認為其源自腺垂體實質(zhì)細胞，約占顱內(nèi)腫瘤的10％-15％。而腺垂體可分泌多種激素，源自腺垂體實質(zhì)細胞的垂體瘤因異常分泌激素而引起相關癥狀。催乳素瘤分泌催乳素，導致性功能減退和溢乳癥;促甲狀腺激素瘤可以引起甲狀腺功能亢進;促腎上腺皮質(zhì)激素瘤

2、可分泌促腎上腺皮質(zhì)激素，從而導致Cushing綜合征;生長激素瘤分泌生長激素，引起巨人癥和肢端肥大癥;促性腺激素瘤因很少分泌活性的促黃體激素和卵泡刺激素而出現(xiàn)的性功能亢進，大部分促性腺激素瘤分泌的激素沒能引起病人無明顯臨床表現(xiàn)而被認為是無功能瘤;其它的無功能瘤不分泌已知的激素。垂體瘤雖然呈良性生長，但是約50％的腫瘤侵襲臨近的結(jié)構(gòu)如硬腦膜、視神經(jīng)及骨質(zhì)而被認為是侵襲性垂體瘤。
　　現(xiàn)已知垂體瘤不是增殖的垂體細胞，而是腫瘤細胞。垂體

3、瘤的發(fā)生、發(fā)展機制和其它良性腫瘤相似。大多數(shù)不同表型的垂體腺瘤，包括激素活躍型腺瘤及非功能性腺瘤，盡管在一些垂體瘤中含有多個腫瘤集落，但這些集落起源于不同細胞，說明垂體瘤具有單克隆性，是來源于一個發(fā)生了基因改變的多能干細胞。
　　CCDN1編碼細胞周期素D1，是垂體瘤的可能癌基因，細胞周期素D可以激活細胞周期素D依賴性激酶CDK4和CDK6，CDK4和CDK6可以嶙酸化Rb抑癌基因蛋白。磷酸化的Rb不再結(jié)合S期轉(zhuǎn)錄因子E2F，使細

4、胞進入S期。
　　P53抑癌基因突變在人類腫瘤中最常見，被認為與50％的癌種有關。其基因產(chǎn)物半衰期很短，用免疫組化的方法在正常組織中很難檢測到;但突變基因的產(chǎn)物半衰期較長。其檢測陽性率隨之增高P53表達和垂體瘤侵襲性相關，且只在侵襲性腫瘤中表達，可作為與垂體瘤的侵襲性有關的一個標志。
　　Cdc14幾乎存在于所有的真核生物中，近年來發(fā)現(xiàn)Cdc14基因編碼的蛋白是雙特異性絲/蘇氨酸磷酸酶蛋白家族的新成員，大量實驗證實Cdc14

5、可逆轉(zhuǎn)Cdk活性，在芽殖酵母細胞有絲分裂退出蛋白網(wǎng)絡中起關鍵性作用。人類中存在兩種Cdc14的同源物，分別稱為hCdc14A、hCdc14B，兩者有50％的序列同源性。hCdc14A蛋白水平的變化可導致細胞染色體分離和胞漿分裂的異常，從而影響細胞周期的正常運行。并且該蛋白表達量的異常，還伴隨出現(xiàn)形態(tài)異常的細胞。HCdc14A可能通過對Erk3去磷酸化對抗其在細胞周期調(diào)控中的負性作用，進而也對抗了Cdk的磷酸化作用。同時，也可能通過穩(wěn)定或

6、增加Erk3與cyclinD3復合物，在細胞增殖中發(fā)揮一定作用。研究表明野生型P53腫瘤細胞中hCdc14A蛋白的表達水平明顯低于突變的P53腫瘤細胞中的hCdc14A表達量，提示在野生型P53腫瘤細胞中可能存在某種機制，抑制hCdc14A的高表達，以保護P53的作用。所以認為hCdc14A的高表達可以抑制P53活性，從而使細胞周期阻止以及細胞的凋亡作用異常。
　　hCdc14A在垂體瘤中的表達情況及其作用還沒有文獻研究。本實驗研

7、究目的是:通過免疫組織細胞化學觀察hCdc14A及P53蛋白在人垂體瘤病理標本中的表達情況，研究hCdc14A及P53蛋白表達與垂體瘤類型、腫瘤侵襲性等臨床預后指標的相關性，探討hCdc14A蛋白在人垂體瘤發(fā)病中的作用。
　　實驗方法：
　　垂體瘤標本:選自2012.6-2012.12浙江大學醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院神經(jīng)外科垂體瘤手術標本。收集患者臨床資料如患者年齡、性別、臨床癥狀、垂體內(nèi)分泌激素水平、腫瘤組織病理類型、影像學資料

8、包括腫瘤大小及腫瘤生長有無鞍外侵襲等。鞍外侵襲性指垂體瘤影像學表現(xiàn)不局限于鞍內(nèi)，向鞍上或鞍旁生長。侵襲性垂體腺瘤的判斷標準:①采用Wilson改良的Hardy分類法，將Ⅲ、Ⅳ級或C、D、E期的腫瘤歸為侵襲性腺瘤;②術前影像學改變，CT及MR可見海綿竇、鞍旁及下丘腦等鄰近結(jié)構(gòu)的破壞;③術中所取鞍底骨質(zhì)、鞍底硬腦膜經(jīng)病理學證實有腫瘤細胞侵犯;④術中見鞍底骨質(zhì)及硬腦膜被侵襲破壞，腫瘤突入蝶竇腔或海綿竇內(nèi)壁穿通，竇內(nèi)結(jié)構(gòu)被腫瘤包繞或腫瘤長入鞍周

9、侵犯腦組織。
　　正常人垂體組織:取自浙江大學解剖教研室，共2例，排除內(nèi)分泌相關疾患。
　　采用免疫組織化學和Western blot檢測hCdc14A及P53在垂體瘤及正常垂體組織中的表達水平，統(tǒng)計分析hCdc14A的表達情況與垂體瘤類型間的關系，hCdc14A的表達與P53表達是否存在一致性。
　　結(jié)果：
　　1病例資料:
　　43例垂體瘤患者中男性19例，年齡為28-73歲，平均年齡為47.6±12.

10、8歲;女性24例，年齡為25-68歲，平均年齡為47.3±12.4歲。功能性垂體瘤共:27例，其中，促腎上腺激素腺(ACTH)瘤5例，生長激素(GH)腺瘤4例，促卵泡刺激素(FSH)腺瘤1例，催乳素(PRL)細胞腺瘤9例，多分泌功能細胞腺瘤9例（其中ACTH/FSH細胞腺瘤1例， FSH/ACTH細胞腺瘤1例，GH/FSH細胞腺瘤1例，GH/PRL細胞腺瘤2例，PRL/ACTH細胞腺瘤2例，TSH/PRL細胞腺瘤1例），無內(nèi)分泌功能腺瘤

11、16例。按Hardy分類法GradeⅠ(微腺瘤，直徑＜10mm)11例，GradeⅡ(包膜完整的大腺瘤，直徑≥10mm)5例，GradeⅢ(侵入蝶竇或海綿竇)17例，GradeⅣ(侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)或顱外轉(zhuǎn)移)10例。按侵襲性分類，侵襲性垂體瘤16例，非侵襲垂體瘤27例。
　　2 hCdc14A在垂體瘤中的表達情況:
　　正常垂體組織未見hCde14A陽性表達。垂體瘤組織中hCdc14A陽性細胞數(shù)明顯高于正常垂體組織(P＜0.

12、01)。復制分裂行為旺盛的侵襲性高的垂體瘤細胞的陽性水平高于正常垂體細胞(P＜0.01)或者非侵襲性低的垂體瘤細胞(P＜0.01)。功能性與非功能性垂體瘤中，hCdc14A陽性細胞數(shù)比較，無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3 P53在垂體瘤中的表達情況:
　　本組43例病例中，P53陽性表達率為18.6％(8/43)，在正常垂體及非襲性垂體瘤組織中，均未見P53陽性表達。侵襲性垂體瘤中，P53陽性表達率為29.6％(8

13、/27)。侵襲性垂體瘤P53陽性表達水平高于正常垂體細胞(P＜0.01）及非侵襲性垂體瘤細胞(P＜0.01)。功能性與非功能性垂體瘤中，P53陽性率比較，無明顯統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。Weston-Blot分析提示:高表達hCdc14A的侵襲性垂體瘤中，均可見P53陽性表達。
　　結(jié)論：
　　hCdc14A在垂體瘤中廣泛表達，且其表達水平和垂體瘤的侵襲性密切相關，而與垂體瘤是否為功能性無密切關系，提示hCdc14A在垂體