茚地那韋和氯喹協(xié)同抑制瘧原蟲生長(zhǎng)研究及減毒瘧原蟲株的構(gòu)建.pdf

1、瘧疾流行區(qū)常伴隨著高頻率的人免疫缺陷病毒（HIV-1）的感染。在瘧原蟲和HIV-1共感染人群中，各自化療藥物之間的相互作用可能對(duì)疾病的治療結(jié)果產(chǎn)生影響。前期實(shí)驗(yàn)證明許多逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑在體外可以有效抑制人惡性瘧原蟲的生長(zhǎng)。因此，有研究報(bào)道逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑和抗瘧藥之間相互作用對(duì)瘧疾和/或艾滋病的治療有影響。本研究中，分別在體外和體內(nèi)模型上，對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒蛋白酶抑制劑——茚地那韋和氯喹在氯喹抗性株和氯喹敏感株中的相互作用進(jìn)行了研究

2、。在體外，采用SYBR Green I的熒光定量法來檢測(cè)藥物的抗瘧活性，用等效線分析法檢測(cè)藥物之間的相互作用。結(jié)果顯示茚地那韋和氯喹在體外無論是對(duì)惡性瘧原蟲（Plasmodium falciparum）藥物敏感株3D7還是多藥耐藥株Dd2都表現(xiàn)出協(xié)同的作用。進(jìn)而，研究了茚地那韋和氯喹在小鼠感染模型上的協(xié)同作用。NIH雌性小鼠（～25g）腹腔接種夏氏瘧原蟲（Plasmodium chabaudi）敏感株ASS或抗性株ASCQ感染的紅細(xì)胞，

3、接種后第4,24,48,72小時(shí)口服給藥。實(shí)驗(yàn)組包括對(duì)照組，不同劑量氯喹單獨(dú)組，不同劑量茚地那韋單獨(dú)組，氯喹和茚地那韋不同濃度比例的聯(lián)合組。第四天，血涂片檢測(cè)感染率，結(jié)果表明茚地那韋和氯喹對(duì)兩種蟲株的生長(zhǎng)都表現(xiàn)出協(xié)同抑制作用，這種協(xié)同效應(yīng)在抗性株中更為明顯。進(jìn)一步研究了這兩個(gè)藥物的聯(lián)合對(duì)小鼠轉(zhuǎn)陰率的影響。72只小鼠隨機(jī)分成6組（每組12只），腹腔接種2×107感染夏氏瘧原蟲抗性株ASCQ的紅細(xì)胞。接種后第三天口服給藥，第一組每天10mg

4、/kg的氯喹連續(xù)給藥4天。第2～5組，每組每天10mg/kg的氯喹聯(lián)合不同劑量的茚地那韋（0.3，0.6，1.2，1.8 g/kg）連續(xù)給藥4天。第6組每天100mg/kg的氯喹連續(xù)給藥4天。接種后第三天開始，每天血涂片直到第九天。結(jié)果表明兩種藥物在合適的劑量搭配時(shí)可以100％清除抗性株且無明顯的毒性。結(jié)果提示我們茚地那韋和氯喹的聯(lián)合可作為一種新型的抗瘧藥復(fù)方。
　　 瘧疾仍然威脅著人類的健康。研制安全、價(jià)廉和有效的瘧疾疫苗是人

5、類控制乃至根除瘧疾的重要途徑。最理想的瘧疾疫苗是減毒全蟲活疫苗。目前常用的手段是對(duì)瘧原蟲進(jìn)行基因修飾以達(dá)到減毒目的。所以，瘧原蟲基因工程的研究變得越來越重要。目前，這方面的研究也取得了很大的成果。在實(shí)驗(yàn)中，在鼠感染模型上對(duì)伯氏瘧原蟲（Plasmodium berghei）進(jìn)行基因修飾從而獲得基因修飾后的瘧原蟲減毒并同時(shí)表達(dá)MUC1蛋白。將含有P.Berghei毒性相關(guān)基因Rhomboid 1的同源序列和MUC1表達(dá)序列的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染伯氏瘧原