蝙蝠葛活性成分對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡和抗增殖作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討蝙蝠葛活性成分對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株誘導(dǎo)凋亡和抗增殖作用及其機(jī)制，為開發(fā)抗腫瘤新中藥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用MTT法測(cè)定蝙蝠葛活性成分對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株的生長(zhǎng)抑制作用；通過倒置顯微鏡、光學(xué)顯微鏡、吖碇橙（AO）/溴化乙啶（EB）染色熒光顯微鏡觀察腫瘤細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞的周期分布相和細(xì)胞凋亡率；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測(cè)藥物處理前后增殖細(xì)胞核抗原 Ki-67及凋亡相關(guān)蛋白酶Casp

2、ase3、8、9及凋亡相關(guān)基因Bcl-2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1） MTT法檢測(cè)結(jié)果，蝙蝠葛活性成分對(duì)人肺癌A549細(xì)胞株有明顯的抑制生長(zhǎng)的作用，且呈現(xiàn)出濃度的依賴性；（2）倒置顯微鏡觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)凝集，細(xì)胞間連接疏松，貼壁能力減弱；（3） HE染色觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)濃縮或染色質(zhì)塊形成，有的細(xì)胞膜起泡形成凋亡小體；（4）AO/EB熒光染色觀察結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞核

3、染色質(zhì)呈橘紅色，胞質(zhì)內(nèi)的橘紅色或橘黃色熒光消失，細(xì)胞周圍可見亮綠色的凋亡小體；（5）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：蝙蝠葛活性成分可以誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生凋亡，加藥組出現(xiàn)亞二倍體峰，并且 GO/G1期細(xì)胞比例顯著增加（P﹤0.01），而S期和G2/M期細(xì)胞比例則明顯下降,將細(xì)胞阻滯在GO/G1期；（6）免疫細(xì)胞化學(xué)ki-67抗原檢測(cè)結(jié)果，蝙蝠葛活性成分作用后ki-67陽性表達(dá)率隨藥物濃度的提高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，表現(xiàn)出濃度的依賴性關(guān)系；凋亡

4、相關(guān)基因表達(dá)檢測(cè)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)組Bcl-2基因蛋白陽性表達(dá)率明顯降低，加藥組Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3表達(dá)增加，與對(duì)照組相比較均有顯著差異（P<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.蝙蝠葛活性成分在體外對(duì)人肺癌 A549細(xì)胞株有顯著的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用。
　　2.蝙蝠葛活性成分抑制增殖作用機(jī)制可能與下調(diào) ki-67蛋白表達(dá),細(xì)胞周期發(fā)生G0/G1期阻滯有關(guān)。
　　3.蝙蝠葛活性成分誘導(dǎo)