甜橙（Citrus sinensis Osbeck）紅肉突變體類胡蘿卜素合成相關基因的克隆與特性分析.pdf

1、華中農業(yè)大學博士學位論文甜橙（CitrussinensisOsbeck）紅肉突變體類胡蘿卜素合成相關基因的克隆與特性分析姓名：陶能國申請學位級別：博士專業(yè)：果樹學指導教師：鄧秀新20060601通過RACE獲得了該基因全長(命名為CitCpi)。序列分析表明，CitCpi編碼100個氨基酸，可能參與調節(jié)柑橘果實發(fā)育。5、以12個甜橙品種為材料，采用同源序列法克隆了copia類反轉錄轉座予的反轉錄酶(RT)區(qū)域。序列分析表明，除夢臍橙和哈

2、姆林甜橙一樣外，其余的10個RT序列高度異質。產生這種異質性的原因主要有移碼、缺失、堿基替換、終止突變等。Southern雜交表明，copia類反轉錄轉座子在甜橙基因組中為多拷貝。RToPCR和Northern雜交沒有發(fā)現(xiàn)copia類反轉錄轉座予在紅肉臍橙和清家臍橙果實和葉片發(fā)育過程中的轉錄活性。6、克隆了紅色暗柳橙和暗柳橙LcybDNA全長(分別命名為HAVL毋b和ALLcyb)。結果表明：HALLcyb和ALLcyb均編碼504個氨

3、基酸，但有5個氨基酸的差別。Southern雜交表明，HALLcyb和ALLcyb均為單拷貝。采用MspllHpaII酶切組合結合Southern雜交發(fā)現(xiàn)，HALLcyb基因組發(fā)生了DNA脫甲基化；CRED—RA分析得到了1個可能發(fā)生DNA脫甲基化的位點，該位點與反轉錄轉座子有關。7、以紅肉臍橙不同發(fā)育時期果肉為材料，構建了一個eDNA文庫。原始文庫包含有約5086X105個克隆，重組率為94％，插入片段大小分布在4002000bp，平

4、均大小為900bp左右。選取300個克隆進行了EST分析，獲得了289個高質量的EST。其中有125個EST與其他物種相應基因的氨基酸序列同源性大于50％；去除重復EST后，獲得了86個單一的EST，主要與細胞防衛(wèi)(256％)、代謝類和蛋白質修飾／自Ir／貯藏(分別為14％和128％)有關。8、EST測序過程中，獲得了2個分別編碼生長素抑制蛋白基因(CitAR)和MADSbox基因(C砌倒DS)全長的克隆。序列分析表明，CitAR編碼1