內(nèi)臟脂肪素在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中的作用初探.pdf

1、研究背景:
　　糖尿病腎病(diabetic kidney disease，DKD)，是糖尿病最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，隨著糖尿病發(fā)病率不斷升高，DKD越來越成為終末期腎病的一個(gè)重要病因。目前認(rèn)為DKD是多因素疾病，受代謝、炎癥、內(nèi)皮功能等多方面影響。內(nèi)臟脂肪素(visfatin，VF)是近些年新發(fā)現(xiàn)的一種脂肪細(xì)胞因子，又稱前B細(xì)胞集落增強(qiáng)因子(pre-B-cellcolony enhancing factor，PBEF)和尼克酰胺磷酸

2、核糖轉(zhuǎn)移酶(nicotinamidephosphoribosyltransferase，Nampt)。VF的生物學(xué)功能復(fù)雜，與脂質(zhì)和能量代謝、炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。目前研究已表明，在2型糖尿病、代謝綜合征及多種急慢性炎性疾病患者中，血漿VF水平增加，提示VF可能在DKD發(fā)病機(jī)制中具有重要作用，對(duì)VF生理功能的深入研究可能為DKD的治療提供新方向。
　　研究目的:
　　觀察DKD動(dòng)物模型db/db小鼠的代謝狀況，評(píng)價(jià)腎臟損害及VF

3、等脂肪因子在db/db小鼠腎臟的表達(dá)，通過抑制炎癥反應(yīng)來了解倍半萜內(nèi)酯(parthenolide，PTN)是否可以影響VF的表達(dá)，以探討VF與DKD的關(guān)系及其在DKD發(fā)病機(jī)制中的可能作用。
　　研究方法:
　　選用瘦素受體缺陷的2型糖尿病db/db小鼠及其雜合子db/m小鼠，在8周齡時(shí)獲取基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，包括測(cè)量體重，留取血尿及腎組織，同時(shí)將小鼠分為對(duì)照組db/m組，實(shí)驗(yàn)組db/db組，以及干預(yù)組db/db+PTN組。在小鼠8周齡

4、、12周齡、16周齡、20周齡時(shí)分批處死，留取血、24小時(shí)尿、腎組織。測(cè)定血中代謝指標(biāo)，包括血糖、血脂、胰島素、胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment-insulinresistance，HOMA-IR);脂肪因子VF、抵抗素、視黃醇結(jié)合蛋白4(retinol bindingprotein4，RBP4);腎臟損害指標(biāo)，包括血肌酐、尿白蛋白、尿N-乙酰-β-D-葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-gluco

5、saminidase，NAG)、尿鈉排泄分?jǐn)?shù)等;通過免疫組織化學(xué)染色方法觀察腎組織VF，免疫印跡觀察腎組織VF、抵抗素的表達(dá)情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　1、與同周齡db/m+NS組小鼠比較，DKD動(dòng)物模型db/db小鼠的體重、血糖、血總膽固醇(total cholesterol，TC)、HOMA-IR、血抵抗素在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(8、12、16、20周齡）顯著高于對(duì)照(p＜0.05);血甘油三酯(triglyceride，TG)在

6、8周齡尤其明顯(p＜0.05);血胰島素在8、12、16周齡顯著高于對(duì)照(p＜0.05);血VF在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于對(duì)照，并在8周齡和12周齡有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05);血RBP4在16、20周齡高于對(duì)照，并在20周齡有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。經(jīng)PTN干預(yù)后，與同周齡db/db+NS小鼠比較，db/db+PTN組小鼠的體重、血糖、TG、血VF無明顯變化;TC在12周齡明顯下降(p＜0.05);血胰島素水平在12、16、20周齡有下降

7、趨勢(shì);HOMA-IR在12、16周齡有下降趨勢(shì)，并在16周齡有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05);血抵抗素水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)（8、12、16、20周齡）有下降趨勢(shì);血RBP4在16、20周齡較有下降的趨勢(shì)，并在20周齡有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　2、與同周齡db/m+NS組小鼠比較，db/db小鼠的尿量在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(8、12、16、20周齡)有增加的趨勢(shì);尿白蛋白濃度及24小時(shí)尿白蛋白水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(8、12、16、20周齡)均有

8、不同程度的增加，并在8、16、20周齡有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05);血肌酐無明顯變化;尿NAG、尿鈉排泄分?jǐn)?shù)在16、20周齡有增加的趨勢(shì)。經(jīng)PTN干預(yù)后，與同周齡db/db+NS小鼠比較，db/db+PTN組小鼠的尿量、血肌酐、NAG無明顯變化;尿白蛋白濃度及24小時(shí)尿白蛋白水平在12周齡有下降趨勢(shì);尿鈉排泄分?jǐn)?shù)在16、20周齡有下降趨勢(shì)。
　　3、VF在各組小鼠的腎小球及小管間質(zhì)中均有分布，主要分布在近端小管上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，其

9、表達(dá)不隨周齡增長(zhǎng)而改變。db/db組小鼠與同周齡db/m組小鼠相比腎臟VF表達(dá)增加（免疫組化陽性染色面積率:8w:2.216±1.036 vs8.968±5.493 vs，p＜0.05;12w:4.138±3.001 vs8.333±3.097;16w:2.122±1.106 vs6.377±2.459，p＜0.05;20w2.419±2.871 vs4.502±1.386。免疫印跡相對(duì)光密度值:8w:1.000±0.150 vs1.2

10、21±0.045, p＜0.05;12w:1.107±0.126 vs1.239±0.066;16w:0.973±0.072 vs1.157±0.061, p＜0.05;20w:1.097±0.185 vs1.157±0.339)。經(jīng)PTN干預(yù)后，db/db+PTN組小鼠腎臟VF表達(dá)與同周齡db/db+NS組小鼠相比無明顯變化（免疫組化陽性染色面積率:8w:8.968±5.493 vs8.765±4.983;12w:8.333±3.09

11、7 vs8.279±4.100;16w:6.377±2.459 vs6.923±2.176;20w4.502±1.386 vs4.071±1.261。免疫印跡相對(duì)光密度值:8w:1.221±0.045 vs1.240±0.085;12w:1.239±0.066 vs1.398±0.308;16w:1.157±0.061 vs1.164±0.188;20w:1.157±0.339 vs1.166±0.254)。
　　4、抵抗素在各組

12、小鼠腎臟中均有表達(dá)，其表達(dá)隨周齡增長(zhǎng)而增加，16周齡db/db組小鼠與同周齡db/m組小鼠相比腎臟抵抗素表達(dá)增加（免疫印跡相對(duì)光密度值:8w:1.000±0.053 vs0.991±0.032;16w:1.168±0.049 vs1.072±0.058, p＜0.05)，經(jīng)PTN干預(yù)后，db/db+PTN組小鼠腎臟抵抗素水平在16周齡與同周齡的db/db+NS組小鼠相比減少(免疫印跡相對(duì)光密度值:8w:0.991±0.032 vs1.0

13、25±0.114;16w:1.168±0.049 vs1.072±0.058, p＜0.05)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:
　　1、db/db小鼠表現(xiàn)出明顯的肥胖、血糖升高、血脂升高、胰島素抵抗等糖尿病表現(xiàn)，該模型同時(shí)伴有腎臟損害特征，PTN可能對(duì)血脂升高和胰島素抵抗有一定改善作用。
　　2、db/db小鼠的血VF、抵抗素、RBP4等脂肪因子水平較對(duì)照組有不同程度的增加，PTN可能對(duì)升高的抵抗素和RBP4有一定改善作用。